第一章 绪论 1
第一节PCR发展简史 1
第二节PCR技术的基本原理和操作 2
一、PCR的基本原理 2
二、PCR的基本成分 2
三、PCR的基本操作 3
第三节PCR的主要应用 4
一、基础研究方面的应用 4
二、临床上的应用 5
三、法医学中的应用 6
四、其它方面的研究 6
本章参考文献 7
第二章 扩增已知序列两侧DNA的PCR 8
第一节 反向PCR 8
一、引言 8
二、基本原理 8
三、材料 8
四、方法 9
五、注意事项 10
六、应用 11
七、小结 13
参考文献 13
第二节 锚定PCR 13
一、引言 13
二、原理 14
三、用连接锚定PCR从基因文库中扩增已知基因侧翼序列 15
四、用互补锚定PCR直接扩增已知序列侧翼cDNA序列 16
五、问题及对策 19
六、小结 20
参考文献 21
第三节RACE-cDNA末端的快速扩增 21
一、引言 21
二、RACE基本原理 22
三、实验方案 23
四、RACE的应用 26
五、小结 26
参考文献 26
第四节 连接介导的PCR 27
一、引言 27
二、原理 27
三、材料 27
四、操作步骤 28
五、注意事项 30
六、应用 31
七、小结 33
参考文献 33
第五节Bubble-PCR 34
一、引言 34
二、原理 34
三、材料与方法 35
四、注意事项 36
五、应用 36
六、小结 37
参考文献 37
第三章 巢式PCR 38
第一节 常规巢式PCR 38
一、引言 38
二、原理 38
三、材料 38
四、方法 39
五、注意事项 39
六、应用与小结 39
参考文献 40
第二节 半巢式PCR 40
一、引言 40
二、材料 40
三、方法 40
四、注意事项 41
五、应用与小结 41
参考文献 41
第三节 反转录巢式PCR 41
一、引言 41
二、材料 41
三、方法 42
四、注意事项 43
五、应用 43
参考文献 43
第四节 共有序列巢式PCR 43
一、引言 43
二、材料 43
三、方法 44
四、注意事项 44
五、应用与小结 44
参考文献 45
第五节 种特异巢式PCR 45
一、引言 45
二、材料 45
三、方法 45
四、注意事项 46
五、应用与小结 46
参考文献 47
第六节 巢式PCR-变性梯度凝胶电泳 47
一、引言 47
二、材料 47
三、方法 47
四、注意事项 48
五、应用与小结 49
参考文献 49
第七节 巢式PCR-限制性片段长度多态性 49
一、引言 49
二、材料 49
三、方法 50
四、注意事项 51
五、应用与小结 51
参考文献 51
第四章 实时荧光定量PCR 52
第一节 实时荧光定量PCR原理 52
一、引言 52
二、概念及原理 52
第二节 实时荧光定量PCR中的荧光化学物质 54
一、引言 54
二、荧光染料 54
三、水解探针 54
四、分子信标 55
五、双杂交探针 56
六、复合探针 57
第三节 实时荧光定量PCR的定量方法 57
一、绝对定量 57
二、相对定量 58
第四节 实时荧光定量PCR的实验方法 60
一、实时定量PCR 61
二、实时定量RT-PCR 63
三、实验方案的优化 65
四、实践中应该注意的问题 67
第五节 实时荧光定量PCR技术的应用 68
一、在病原体检测中的应用 68
二、在肿瘤研究中的应用 69
三、在基因表达研究中的应用 70
四、在细胞因子表达分析中的应用 70
五、在遗传学及SNP分析上的应用 71
本章小结 71
本章参考文献 72
第五章 致突变PCR 74
第一节 随机错误掺入PCR构建突变体库 74
一、引言 74
二、原理 75
三、材料与方法 75
四、注意事项 75
五、讨论 76
六、应用 76
第二节PCR构建定点突变序列或重组序列 77
一、引言 77
二、实验方案 77
方案1重叠延伸PCR 77
方案2大引物PCR 79
方案3重组PCR 80
方案4环状质粒PCR 82
三、注意事项 84
四、讨论 84
五、应用 85
六、小结 86
本章参考文献 86
第六章 测序和DNA合成PCR 87
第一节 不对称PCR 87
一、引言 87
二、引物浓度不对称PCR 87
三、热（引物长度）不对称PCR 89
四、应用 92
五、小结 93
参考文献 93
第二节PCR测序法 94
一、直接测序法 94
二、循环测序法 95
三、全自动DNA测序法 96
四、应用 97
参考文献 97
第三节 乳化液PCR 97
一、引言 97
二、原理 97
三、材料和方法 98
四、应用 105
五、小结 105
参考文献 105
第四节 基于PCR的大片段DNA的合成 106
一、引言 106
二、基本原理 106
三、目的序列、寡核苷酸和测序引物的设计 106
四、操作步骤 108
五、DNA合成时常出现的问题及解决办法 111
六、小结 112
参考文献 112
第七章 免疫PCR 114
第一节immuno-PCR 114
一、引言 114
二、基本原理 114
三、材料和试剂 116
四、方法 116
五、注意事项 121
六、应用 121
七、小结 122
参考文献 122
第二节 免疫捕捉PCR 123
一、引言 123
二、基本原理 124
三、材料 124
四、方法 124
五、注意事项 126
六、应用 127
七、小结 128
参考文献 129
第三节PCR-ELISA 130
一、引言 130
二、原理 130
三、材料 131
四、方法 131
五、注意事项 132
六、应用 132
七、小结 134
参考文献 135
第四节 原位PCR 135
一、引言 135
二、基本原理 135
三、原位PCR方法分类及其设计方案 136
四、原位PCR基本步骤 138
五、原位PCR方法的选择 139
六、原位PCR操作注意事项 140
七、原位PCR存在的问题和结果分析 141
八、原位PCR的应用 142
九、原位PCR操作程序示例 142
十、小结 144
参考文献 145
第八章 PCR芯片 146
第一节PCR芯片的结构及其工作原理 146
一、引言 146
二、原理 146
三、方法 149
四、应用 149
五、小结 149
参考文献 150
第二节 纳升高通量PCR 150
一、引言 150
二、原理 150
三、材料 151
四、实验方法 151
五、注意事项 151
六、应用 152
七、小结 152
参考文献 152
第三节 微流控PCR 152
一、引言 152
二、原理 153
三、材料 153
四、方法 154
五、应用 154
六、小结 154
参考文献 154
第四节 连续流热梯度PCR 154
一、引言 154
二、原理 155
三、材料 155
四、操作方法 155
五、注意事项 155
六、应用 156
七、小结 156
参考文献 156
第五节PCR芯片的应用 156
一、引言 156
二、应用 157
三、注意事项 158
四、小结 159
参考文献 159
第九章 电子PCR和数字化PCR 160
第一节 电子PCR 160
一、引言 160
二、e-PCR概念 160
三、e-PCR的基本原理 161
四、与e-PCR相关的数据库 162
五、e-PCR的使用方法 162
六、应用 165
七、致谢 168
参考文献 168
第二节 数字PCR和微流体数字PCR技术 169
一、引言 169
二、数字PCR的原理 170
三、数字PCR的操作及应用 170
四、微流体数字PCR 173
参考文献 177
第十章 其它PCR方法 179
第一节高（G+C）含量DNA的PCR扩增 179
一、使用增强剂改善高（G+C）含量DNA模板的PCR扩增 179
二、NaOH对模板进行预处理改善高（G+C）含量DNA的PCR扩增 182
三、利用高温PCR体系改善高（G+C）含量DNA模板的PCR扩增 183
四、应用 183
五、小结 184
参考文献 184
第二节 长片段PCR 185
一、引言 185
二、原理 185
三、材料 185
四、方法 186
五、注意事项 187
六、应用 189
七、小结 190
参考文献 191
第三节 利用热激活引物进行热启动PCR 191
一、引言 191
二、原理 191
三、材料 192
四、方法 192
五、注意事项 194
六、应用 194
七、小结 196
参考文献 197
第四节 融合PCR 197
一、引言 197
二、融合PCR的原理 197
三、应用于基因插入的融合PCR的具体操作步骤 198
四、融合PCR的应用 198
五、融合PCR操作方法的注意事项 201
六、小结 202
参考文献 202
第五节 不依赖连接反应的克隆PCR 203
一、引言 203
二、基本原理 203
三、材料 204
四、方法 204
五、注意事项 206
六、应用 206
参考文献 207
第六节 菌落PCR 208
一、引言 208
二、原理 208
三、材料 208
四、操作方法 208
五、注意事项 209
六、应用 209
七、小结 209
参考文献 209
第十一章 PCR在基因分型中的应用 210
第一节 任意引物PCR 210
一、引言 210
二、任意引物PCR的基本原理及技术特点 210
三、AP-PCR方法 210
四、RAP-PCR方法 211
五、注意事项 212
六、应用 213
七、小结 216
参考文献 216
第二节 通用PCR 217
一、引言 217
二、原理 217
三、材料 217
四、方法 217
五、注意事项 219
六、应用 219
七、小结 220
参考文献 220
第三节rep-PCR 221
一、引言 221
二、基本原理 221
三、材料 221
四、方法 223
五、注意事项 224
六、应用 225
七、小结 226
参考文献 227
第四节 序列特异性引物PCR 227
一、引言 227
二、原理 228
三、材料 228
四、方法 228
五、注意事项 230
六、应用与小结 231
参考文献 231
第五节 简单序列重复区间PCR 231
一、引言 231
二、原理 231
三、材料 232
四、方法 232
五、注意事项 233
六、应用 233
七、小结 234
参考文献 234
第六节 钳制PCR 235
一、引言 235
二、原理 235
三、材料 235
四、方法 236
五、注意事项 236
六、应用 236
参考文献 236
第七节 序列特异性寡核苷酸多态性PCR 237
一、原理 237
二、试剂 237
三、方法 238
四、注意事项 241
五、应用 242
参考文献 242
第十二章 PCR在临床诊断及流行病调查中的应用 243
第一节 表位特异PCR 243
一、引言 243
二、原理 243
三、材料 243
四、方法 243
五、应用 244
六、小结 244
参考文献 244
第二节 双标记PCR 245
一、引言 245
二、原理 245
三、材料 245
四、方法 245
五、应用 245
六、注意事项 245
参考文献 246
第三节 降落PCR 246
一、引言 246
二、原理 246
三、材料 246
四、方法 246
五、降落PCR与常规PCR的比较 247
六、应用 248
七、小结 249
参考文献 249
第四节16SrRNA PCR 250
一、引言 250
二、原理 250
三、材料及设备 251
四、方法 251
五、注意事项 252
六、应用 252
七、小结 253
参考文献 254
第五节PCR偶联连接酶链式反应 255
一、原理 255
二、材料 255
三、方法 255
四、注意事项 257
五、应用 258
参考文献 259
第六节 快速PCR 259
一、引言 259
二、原理 259
三、材料 260
四、方法 260
五、注意事项 264
六、小结 266
参考文献 266
第七节 稀有限制性位点PCR 267
一、引言 267
二、原理 267
三、材料 267
四、方法 269
五、注意事项 270
六、应用 270
七、小结 271
参考文献 271
第十三章PCR在法医学中的应用 273
第一节 小卫星可变重复序列PCR 273
一、引言 273
二、原理 273
三、方法 274
四、应用 277
五、小结 278
参考文献 279
第二节 短串联重复序列的PCR 280
一、引言 280
二、原理 280
三、材料 281
四、方法 282
五、注意事项 286
六、应用 286
七、小结 288
参考文献 288
第三节 单核甘酸多态性PCR 289
一、引言 289
二、原理 289
三、材料及方法 292
四、SNP-PCR检测方法 293
五、数据库 295
六、应用 296
七、小结 298
参考文献 298
第四节 全基因组PCR 300
一、引言 300
二、全基因组PCR的种类 300
三、基因组DNA模板的制备 304
四、不同WGA方法的比较 305
五、WGA的产物分析及应用 305
六、小结 307
参考文献 308
第五节 单分子PCR 309
一、引言 309
二、原理 309
三、材料 309
四、方法 309
五、注意事项 310
六、SM-PCR的应用 310
七、小结 311
参考文献 311
第十四章 PCR在遗传病诊断中的应用 312
第一节 多重PCR 312
一、引言 312
二、原理 312
三、材料 313
四、方法 313
五、常见问题的解决 316
六、应用 317
七、小结 322
参考文献 322
第二节 常用的等位基因特异性PCR 325
一、引言 325
二、原理 325
三、材料 325
四、方法 325
五、注意事项 327
六、对等位基因特异PCR的改进 327
七、应用与小结 328
参考文献 329
第三节 简单等位基因辨别PCR 329
一、引言 329
二、原理 329
三、材料 331
四、方法 331
五、注意事项 331
六、应用与小结 332
参考文献 332
第四节L -DNA标记的等位基因特异性PCR 332
一、引言 332
二、原理 332
三、材料 332
四、方法 333
五、注意事项 334
六、应用与小结 334
参考文献 334
第五节 同源一步荧光等位基因特异性PCR 334
一、引言 334
二、原理 335
三、材料 335
四、方法 335
五、注意事项 337
六、应用与小结 337
参考文献 337
第六节 低温变性共扩增PCR 337
一、引言 337
二、原理 338
三、材料 339
四、方法 339
五、小结 339
参考文献 339
第七节 限制性片段长度多态性PCR 340
一、原理 340
二、材料 341
三、操作方法 341
四、注意事项 342
五、应用 342
参考文献 343
第八节 PCR-变性梯度凝胶电泳 343
一、原理 343
二、材料 343
三、操作方法 344
四、注意事项 345
五、应用 345
参考文献 346
第十五章 PCR在癌症诊断中的应用 347
第一节 甲基化特异PCR 347
一、引言 347
二、基本原理 347
三、材料 347
四、方法 348
五、注意事项 349
六、应用 350
七、小结 351
参考文献 351
第二节 差异显示PCR 352
一、引言 352
二、原理 352
三、方法 353
四、应用 356
五、小结 358
参考文献 358
第三节PCR单链构象多态性 359
一、原理 359
二、材料 360
三、方法 360
四、注意事项 362
五、应用 363
参考文献 363
第四节 单细胞PCR 364
一、引言 364
二、基本原理 364
三、材料和方法 364
四、注意事项 367
五、应用 368
六、小结 368
参考文献 369
第十六章 PCR在动物学中的应用 370
第一节 微卫星PCR在动物分类和进化中的应用 370
一、引言 370
二、基本原理 370
三、材料 371
四、方法 371
五、注意事项 371
六、应用 372
七、小结 372
参考文献 372
第二节 巢式PCR在动物疾病诊断中的应用 373
一、引言 373
二、基本原理 373
三、材料 373
四、方法 373
五、注意事项 374
六、应用 374
七、小结 375
参考文献 375
第三节T接头介导PCR在转基因动物外源基因定位中的应用 375
一、引言 375
二、原理 376
三、材料 376
四、方法 376
五、注意事项 377
六、应用 378
七、小结 378
参考文献 378
第四节 等温扩增技术在动物学中的应用 378
一、引言 378
二、基本原理 378
三、材料 379
四、方法 379
五、注意事项 381
六、应用 382
七、小结 383
参考文献 383
索引 384