实验室安全守则 1
第一部分 植物发育相关突变体和转基因植株的获得及初步分析 3
第一节 利用化学方法获得植物突变体及功能基因的克隆 4
实验一 EMS诱变获得植物突变体库 4
实验二 图位克隆技术 7
实验三 TILLING技术 11
第二节 利用农杆菌介导的植物转基因技术 15
实验四 农杆菌培养、感受态细胞准备和质粒转化 20
实验五 农杆菌介导的拟南芥转基因方法 24
实验六 农杆菌介导的烟草转基因方法 32
实验七 农杆菌介导的水稻转基因方法 35
第三节 拟南芥T-DNA插入突变体的获得和鉴定 40
实验八 拟南芥T-DNA插入突变体库的获得 43
实验九 拟南芥T-DNA插入突变体的筛选——植株表型分析和鉴定 45
实验十 T-DNA插入位点基因的克隆和鉴定——Tail-PCR 51
实验十一 T-DNA插入突变体纯合体的鉴定 61
实验十二 T-DNA插入突变体的互补实验 65
第四节 多基因突变体的获得 67
实验十三 拟南芥杂交技术 68
第五节 目的基因RNAi及过量表达转基因植株的获得 71
实验十四 RNAi原理及基本步骤 71
实验十五 过量表达的原理及基本步骤 75
实验十六 拟南芥RNAi及过量表达转基因植株的获得 78
第二部分 植物发育相关突变体及转基因植株的验证和分析 80
第一节 转基因植株DNA水平的鉴定 80
实验十七 PCR方法验证外源基因转入植株 81
实验十八 Southern杂交验证转基因植株中外源基因的拷贝数 83
第二节 转基因植株mRNA水平的鉴定 92
实验十九 Northern杂交分析基因的表达 92
实验二十 RT-PCR方法分析基因的表达 99
实验二十一 Real-time PCR方法分析基因的表达 105
实验二十二 mRNA原位杂交技术 111
第三节 转基因植株蛋白质水平的鉴定 120
实验二十三 转基因植株蛋白质水平的检测（Western blot） 121
实验二十四 植物组织免疫酶和免疫荧光技术 125
第三部分 生物信息学方法及其他常用分子生物学技术 128
第一节 生物信息学方法 128
第二节 启动子分析 134
实验二十五 启动子序列的克隆——染色体步移法 134
实验二十六 启动子和GUS融合转基因植株的染色分析 139
实验二十七 DR5::GUS融合转基因植株的染色分析 143
第三节 定点突变获得突变体的方法 144
实验二十八 利用QuikChange Site-directed Mutagenesis试剂盒获得定点突变基因 145
第四节 蛋白质亚细胞定位技术——基因枪法 149
实验二十九 基因枪法转化洋葱表皮细胞 149
第五节 DNA和蛋白质互作的研究方法 153
实验三十 CHIP技术 161
第六节 蛋白质相互作用的研究方法 166
实验三十一 酵母双杂交技术 172
实验三十二 免疫共沉淀技术 177
第四部分 植物组织培养技术 182
实验三十三 植物培养基的配制 182
实验三十四 烟草无菌苗的培养 192
实验三十五 水稻种子愈伤组织的培养和幼苗的再生 195
第五部分 植物发育生物学研究中常用的细胞学方法 201
实验三十六 植物组织石蜡切片技术 201
实验三十七 植物组织冰冻切片技术 207
实验三十八 烟草小孢子发育过程的观察 211
实验三十九 拟南芥花粉表型的分析 220
实验四十 烟草大孢子发育过程的观察 227
实验四十一 拟南芥胚珠透明技术——胚胎发育过程的观察 230
实验四十二 烟草胚胎分离技术及胚胎发育过程的观察 233
缩写词 238
参考文献 241