第一部分 生殖医学技术 3
第一章 人类胚胎实验室管理与质量控制 3
一、仪器设备 3
二、实验室管理 3
目录 3
三、实验室安全与感染控制 4
四、实验室质量控制 5
五、各种文件和工作记录的管理与保存 7
六、几种常用的生物学质控检测方法 7
一、培养基的演变过程 9
第二章 人类胚胎培养基 9
二、培养基的基本成分与作用 10
第三章 胚胎体外发育与质量评估 14
一、卵母细胞成熟与质量评估 14
二、体外受精 16
三、胚胎在体外的发育 19
四、胚胎继续发育能力的评估 20
五、胚胎植入 23
一、概述 25
二、适应证与禁忌证 25
第四章 体外受精与胚胎移植 25
三、准备工作 26
四、超促排卵和卵泡发育的监测 26
五、体外受精与胚胎移植步骤 28
六、配子移植技术 33
七、黄体功能维持与随访 34
八、并发症及其处理 35
九、影响IVF-ET成功的因素 38
第五章 人工授精 40
一、人工授精的适应证与禁忌证 40
二、人工授精前的准备工作 41
三、促进卵泡发育和监测排卵 42
四、精液体外处理 44
五、授精 45
六、影响人工授精妊娠率的因素 46
第六章 男性学实验室技术 47
一、人类精液的采集与检验 47
二、精液常规分析结果评估 51
三、精子形态学分类 52
四、白细胞检测方法 55
五、精液微生物学检查 57
六、精浆生化检查 58
七、与男性不育有关的内分泌检查 65
八、精子功能检测 67
九、计算机辅助精子分析 75
十、精子库 76
第七章 人类精子制备与优选技术 77
一、精液样本的采集 77
二、常用培养液的配制与保存 78
三、常用的几种精子制备方法 79
四、人类X与Y精子分离技术 81
五、睾丸活检与附睾取精 83
一、囊胚培养环境 87
第八章 囊胚培养与移植 87
二、囊胚培养与移植的适应条件 88
三、囊胚培养与移植程序 89
四、囊胚培养与移植注意事项 90
五、囊胚培养与移植意义 91
六、囊胚培养与移植展望 92
第九章 人类未成熟卵母细胞体外成熟培养 93
一、IVM研究进展 93
二、卵母细胞成熟的调节机制 94
三、卵母细胞在体内的发育过程 95
四、未成熟卵的来源与获取方法 96
五、未成熟卵培养方法 97
六、IVM的应用 98
七、存在问题与解决方法 100
第十章 配子、胚胎和卵巢组织的冷冻技术 102
一、冷冻技术基本原理 102
二、精子冷冻保存 104
三、卵母细胞冷冻保存 106
四、原核期和早期分裂期胚胎冷冻保存 109
五、囊胚冷冻保存 112
六、卵巢组织冷冻保存 114
一、卵细胞浆内单精子注射 117
第十一章 显微操作技术 117
二、胚胎辅助孵化技术 124
四、卵子重构技术 126
三、胚胎分割技术 127
第十二章 胚胎植入前遗传学诊断 132
一、植入前遗传学诊断概况 132
二、胚胎活检技术 134
三、荧光原位杂交技术 137
四、单细胞PCR 139
五、人精子荧光原位杂交技术 142
一、X染色质检查 146
第十三章 细胞遗传学诊断技术 146
二、Y染色质检查 149
三、外周血淋巴细胞培养染色体检查 150
四、羊水细胞培养染色体检查 152
五、绒毛细胞培养染色体检查 154
六、染色体显带技术 155
七、姊妹染色单体互换技术 158
八、高分辨染色体显带技术 159
九、染色体脆性位点检测技术 160
十、人类染色体的识别与核型分析 161
十一、人类卵子、受精卵和胚胎染色体分析 175
十二、人类精子染色体分析 177
第十四章 动物体外受精技术 179
一、小鼠的体外受精与胚胎移植技术 179
二、牛的体外受精技术 184
三、羊的体外受精技术 186
第十五章 动物克隆（细胞核移植）和卵子重构（生发泡移植） 188
一、克隆的定义 188
二、细胞核移植的研究历史与现状 189
三、克隆技术的应用前景 190
四、动物克隆的方法与影响因素 192
五、哺乳动物细胞核移植（克隆）操作方法与步骤 194
六、卵子重建（生发泡移植） 203
七、克隆技术存在的问题 204
第十六章 胚胎干细胞 206
一、胚胎于细胞的生物学特征 206
二、胚胎干细胞的研究史 207
三、胚胎干细胞体外培养 207
四、胚胎干细胞的分化与定向分化 219
五、胚胎干细胞的应用前景 221
六、胚胎干细胞研究中存在的问题 225
七、人胚胎干细胞的研究进展 226
一、转基因动物研究概况 231
第十七章 转基因动物研究 231
二、转基因动物原理与技术方法 233
三、转基因动物鉴定 238
四、转基因动物的医药应用前景 239
五、转基因动物存在的问题 243
六、提高转基因效率的方法 244
第二部分 生殖医学图谱 249
一、配子发生 249
图1-1 减数分裂示意图 249
图1-2 卵子发生示意图 250
图1-3 精子发生示意图 251
图1-4 卵泡发育和卵母细胞成熟示意图 252
图1-5 卵泡发育过程 253
图1-6 成熟卵泡结构 253
图1-7 人卵巢组织中的初级卵泡 254
图1-8 人卵巢组织中的次级卵泡 254
图1-9 人卵巢组织中的次级卵泡 254
图2-3 未成熟卵子 255
图2-2 成熟卵子 255
图2-1 接近排卵的成熟卵子 255
二、人类卵子 255
图2-4 未成熟卵子 256
图2-5 典型的未成熟卵子 256
图2-6 过熟卵子 256
图2-7 成熟卵子 257
图2-8 MⅡ期卵子 257
图2-9 GV期卵子 257
图2-10 MⅠ期卵子 257
图2-13 体外成熟卵子 258
图2-14 MⅡ期卵子 258
图2-12 MⅡ期卵子 258
图2-11 2个晚MⅠ期卵子 258
图2-15 GV期卵子 259
图2-16 体外成熟卵子 259
图2-17 未成熟卵子 259
图2-18 发育不良卵子 259
图2-19 异常卵子 259
图2-20 异常卵子 259
图2-21 异常MⅡ期卵子 259
图2-25 轻度变形的卵子 260
图2-24 异常卵子 260
图2-23 异常卵子 260
图2-22 MⅡ期卵子 260
图2-26 质量差的卵子 261
图2-27 胞浆收缩的MⅡ期卵子 261
图2-28 胞浆异常的M Ⅰ期卵子 261
图2-29 胞浆含小包涵体的MⅡ期卵子 261
图2-30 严重空泡变性的卵子 262
图2-31 胞浆似空泡样变的MⅡ期卵子 262
图2-32 透明带异常卵子 262
图2-33 透明带异常卵子 262
图2-37 双卵畸形 263
图2-36 6细胞期胚胎 263
图2-35 严重空泡变性的卵子 263
图2-34 含多余胞浆的异常卵子 263
图2-38 双卵发育成的早期胚胎 264
图2-39 双卵发育成的囊胚 264
图2-40 巨大卵 264
图2-41 含双GV未成熟卵子 264
图2-42 双卵异常卵子 264
图2-45 卵子纺锤体 265
图2-46 卵子纺锤体 265
图2-47 卵子纺锤体 265
图2-44 卵子纺锤体 265
图2-43 卵子纺锤体 265
三、人类精子和精细胞 266
图3-1 透射电镜人类精子超微结构（×6 000） 266
图3-2 透射电镜颈段膨大的异常精子（×20 000） 267
图3-3 透射电镜正常精子颈段和中段（×20 000） 267
图3-4 透射电镜精子颈段异常（×10 000） 267
图3-5 透射电镜精子头部异常（×20 000） 268
图3-6 透射电镜精子头部异常（×20 000） 268
图3-7 透射电镜精子尾部超微结构（×20 000） 268
图3-12 小头精子扫描电镜图（10 000） 269
图3-11 头部及颈部异常精子扫描电镜图（×10 000） 269
图3-10 圆头精子扫描电镜图（×15 000） 269
图3-8 透射电镜异常精细胞（×8 000） 269
图3-9 正常精子扫描电镜图（×10 000） 269
图3-13 大头精子扫描电镜图（×15 000） 270
图3-14 精原细胞 270
图3-15 精原细胞 270
图3-16 初级精母细胞 270
图3-17 次级精母细胞 270
图3-18 3个核的次级精母细胞 270
图3-23 3个核的精子细胞 271
图3-25 正常形态精子 271
图3-24 4个核的精子细胞 271
图3-21 精子细胞 271
图3-22 核偏向一侧的精子细胞 271
图3-20 异常次级精母细胞 271
图3-19 4个核的次级精母细胞 271
图3-26 精液中的淋巴细胞 272
图3-27 精液中的白细胞 272
图3-28 精液中的前列腺细胞 272
图3-34 尖头精子 273
图3-33 联体畸形精子 273
图3-32 头部畸形精子 273
图3-31 长头精子 273
图3-29 头部畸形精子 273
图3-30 小头畸形精子 273
图3-35 头部畸形精子 274
图3-36 头部畸形精子 274
图3-37 尾部异常精子 274
图3-38 畸形精子 274
图3-39 双尾精子 274
图3-40 异常精子 274
图3-43 异常精子 275
图3-44 异常精子 275
图3-41 尾部弯曲的精子 275
图3-42 异常精子 275
四、人类受精卵 276
图4-1 形态正常的受精卵 276
图4-2 双原核受精卵 276
图4-3 正常受精卵 276
图4-4 正常受精卵 276
图4-7 受精卵 277
图4-8 受精卵 277
图4-5 受精卵 277
图4-6 质量差的受精卵 277
图4-9 受精卵 278
图4-10 受精卵 278
图4-11 受精卵 278
图4-12 3个原核的异常受精卵 278
图4-13 3PN受精卵发育成的早期胚胎 279
图4-14 6PN受精卵 279
图4-15 异常受精卵 279
图5-2 卵裂近完成的胚胎 280
图5-3 2细胞期Ⅰ级胚胎 280
图5-1 正在卵裂的胚胎 280
五、人类胚胎 280
图5-4 2细胞期Ⅰ级胚胎 281
图5-5 3个2细胞期Ⅰ级胚胎 281
图5-6 3细胞期胚胎 281
图5-7 4细胞期Ⅰ级胚胎 281
图5-8 2个4细胞期Ⅰ级胚胎 282
图5-9 4细胞期Ⅰ级胚胎 282
图5-10 8细胞期Ⅰ级胚胎 282
图5-11 8细胞期Ⅰ级胚胎 282
图5-15 8细胞期胚胎 283
图5-14 14细胞期胚胎 283
图5-12 8细胞期Ⅰ级胚胎 283
图5-13 10细胞期胚胎 283
图5-16 2个4细胞期Ⅱ级胚胎 284
图5-17 3个Ⅲ级胚胎 284
图5-18 Ⅳ级胚胎 284
图5-19 2个冷冻复苏后胚胎 284
图5-20 4细胞期胚胎 284
图5-23 透明带异常的6细胞期胚胎 285
图5-24 冷冻复苏后胚胎 285
图5-25 透明带致密的8细胞期胚胎 285
图5-22 形态异常受精卵发育成的胚胎 285
图5-21 形态异常受精卵 285
图5-26 冷冻前胚胎 286
图5-27 冷冻中的胚胎 286
图5-28 早期桑葚胚 286
图5-29 桑葚胚 286
图5-30 过早融合的胚胎 287
图5-31 晚期桑葚胚 287
图5-32 早期囊胚 287
图5-33 早期囊胚 287
图5-38 异常囊胚 288
图5-37 囊胚发育过程 288
图5-35 孵出中的囊胚 288
图5-34 扩张期囊胚 288
图5-36 完全孵出的囊胚 288
图5-39 质量差的囊胚 289
图5-40 冷冻复苏后胚胎 289
图5-41 活检后囊胚 289
图5-42 孵出后囊胚 289
图5-43 早期囊胚 289
六、胚胎显微操作 290
图6-1 化学法辅助孵化 290
图6-3 机械法辅助孵化 291
图6-2 激光打孔法辅助孵化 291
图6-4 卵胞浆内单精子显微注射 292
图6-5 胚胎活检 293
图6-6 人类早期胚胎单个卵裂球体外发育能力 294
图6-7 胚胎植入前遗传学诊断（卵裂球F1SH） 295
图6-8 精子FISH（荧光显微镜下观察结果） 296
七、人类染色体 297
图7-1 正常女性染色体 297
图7-2 正常男性染色体 297
图7-5 47,XXX 298
图7-3 46,XX,t（1q;4q） 298
图7-4 46,X,dup（Xq） 298
图7-6 46,XX,t（3p;7q） 299
图7-7 46,XY,5p 299
图7-8 45,XY,-15,+t（8p;15） 299
图7-9 姊妹染色单体互换（sce）原始核型 300
图7-10 45,XY,t（13;14）（罗伯逊易位） 300
图7-11 45,X 300
图7-14 47,X,i（Xq）,i（Xq） 301
图7-13 46,XY,t（21;21）易位型21—三体 301
图7-12 46,X,del（Xq） 301
图7-15 46,XX,r（15） 302
图7-16 46,X,i（Xp） 302
图7-17 47,XX,+21 302
图7-18 47,XXY 303
图7-19 47,XYY 303
图7-20 四倍体原始核型 303
图7-21 未受精卵子染色体 303
图7-22 未受精卵子染色体 303
图8-1 牛卵子核移植技术 304
八、胚胎研究（核移植、胚胎干细胞、转基因、动物实验） 304
图8-2 核移植取核 305
图8-3 小鼠卵子纺锤体 305
图8-4 转基因操作 306
图8-5 转基因操作 306
图8-6 昆明鼠胚胎 306
图8-7 荧光染色小鼠囊胚细胞计数 307
图8-8 饲养层上生长1天的囊胚 307
图8-9 饲养层上生长3天的囊胚 307
图8-12 F3代ES细胞集落 308
图8-11 饲养层上生长5天的ES细胞集落 308
图8-10 饲养层上发育4天的昆明鼠ES细胞集落 308
图8-13 在饲养层上形成的原生殖细胞（PGCs）集落 309
图8-14 饲养层上形成的PGCs细胞集落 309
图8-15 PGCs细胞自行分化为具有内、中、外三个胚层的血管状结构 309
图8-16 PGCs细胞自行分化的心肌样细胞 310
图8-17 ES细胞诱导分化形成的神经元样细胞 310
图8-18 ES细胞集落扫描电镜 310
图8-19 ES细胞扫描电镜 310
主要参考文献 311
英文缩略 317