第一部分 实验须知 1
实验一 组织细胞中基因组DNA的提取 10
第二部分 DNA重组实验 11
第一章 目的基因的获取 12
实验二 组织细胞中RNA的提取及cDNA的合成 14
实验三 核酸分子的定量 18
实验四 聚合酶链式反应扩增目的基因 20
第二章 目的基因与载体的重组 24
实验五 限制性核酸内切酶对DNA进行酶切 24
实验六 电泳分离DNA片段 26
实验七 DNA片段的回收与纯化 27
第三部分 重组DNA的表达 27
实验八 目的基因与载体片段的连接 29
第三章 重组DNA的筛选与扩增 31
实验九 感受态细胞的制备 31
实验十 重组DNA的转化与筛选 33
实验十一 重组质粒的提取与鉴定 34
第一章 在大肠杆菌中表达重组蛋白 37
实验十二 温度诱导表达 38
实验十三 化学诱导表达 42
实验十四 细菌裂解与蛋白质表达产物的电泳鉴定 45
第二章 蛋白质表达产物的鉴定 45
实验十五 蛋白质表达产物的分离 55
实验十六 蛋白质表达产物的定量 58
第三章 在哺乳动物细胞中表达重组DNA 64
实验十七 重组DNA转染哺乳动物细胞 64
实验十八 细胞裂解与免疫沉淀 67
实验十九 蛋白质印记技术 70
第四部分 核酸分子杂交 77
第一章 核酸探针的标记 77
实验二十 切口平移法 78
实验二十一 随机引物法 80
实验二十二 DNA探针的末端标记 82
第二章 核酸分子杂交 85
实验二十三 Southern印迹杂交 85
实验二十四 Northern印迹杂交 90
实验二十五 原位杂交 94
第五部分 生物信息学在分子生物学实验中的应用 101
实验二十六 网上生物学资源的利用 101
实验二十七 序列的数据库查询 105
实验二十八 序列的相似性分析 107
实验二十九 软件分析开放读框及预测二级结构 109
附录一 医学分子生物学实验常用参数 111
附录二 常用试剂的配制 114