1．前言 1
1.1 肝功能衰竭及其治疗现状 1
目录 1
1.2 人工肝与肝支持 2
1.3 生物人工肝 3
1.4 有关研究存在的不足 4
1.5 本研究的目的及意义 5
1.6 参考文献 5
2．人肝细胞的分离、常规培养及其分泌上清生物活性的观察 9
2.1 材料与方法 10
2.1.1 材料及主要试剂 10
2.1.2 人胎肝细胞的分离 10
2.1.3 胎肝细胞的培养 11
2.1.4 培养胎肝细胞的形态与功能观察 13
2.1.5 大鼠肝细胞的分离、培养及HCS作用的形态观察 13
2.1.7 小鼠FHF模型的复制及实验分组 14
2.1.6 大鼠肝细胞DNA合成率的测定 14
2.1.8 HCS对FHF小鼠作用的观察 15
2.1.9 统计分析 16
2.2 结果 16
2.2.1 胎肝细胞的分离与常规培养 16
2.2.2 培养胎肝细胞的形态观察 16
2.2.3 培养胎肝细胞蛋白合成的检测 18
2.2.4 HCS刺激大鼠肝细胞增殖的形态观察 18
2.2.5 HCS对大鼠肝细胞DNA合成的影响 20
2.2.6 HCS对小鼠存活率的影响 21
2.2.7 HCS对小鼠血清ALT水平的影响 22
2.2.8 实验小鼠肝脏病理改变 22
2.3 讨论 23
2.3.1 人胎肝细胞的分离与培养 23
2.3.2 胎肝细胞在肝衰竭治疗中的作用及意义 24
2.3.3 早期胎肝治疗重型肝炎的机制与HCS的作用 25
2.4 参考文献 26
3．高密度悬浮培养人肝细胞系统的建立 30
3.1 材料与方法 31
3.1.1 主要试剂及器材 31
3.1.2 肝细胞-肝非实质细胞的分离 32
3.1.3 肝细胞-肝非实质细胞的微载体粘附培养 33
3.1.4 肝细胞-肝非实质细胞的球形聚集培养 33
3.1.5 聚集肝细胞的中空纤维管培养 33
3.1.6 培养肝细胞的功能与形态观察 34
3.2 结果 35
3.2.1 肝细胞-肝非实质细胞的混合微载体培养 35
3.2.2 肝细胞-肝非实质细胞的混合球体培养 38
3.2.3 中空纤维管对肝细胞球形体的培养 43
3.3 讨论 45
3.3.1 肝细胞的微载体培养 45
3.3.2 肝细胞球形聚集体培养 46
3.3.3 肝细胞-肝非实质细胞的混合培养 47
3.3.4 中空纤维管培养球形聚集肝细胞 48
3.4 参考文献 50
4．生物人工肝支持系统的构建及其功能评价 53
4.1 材料与方法 54
4.1.1 主要试剂与器材 54
4.1.2 肝细胞的分离与培养 54
4.1.3 EBLSS的组成 55
4.1.4 EBLSS生物合成功能的评价 55
4.1.5 EBLSS药物转化实验 56
4.1.6 EBLSS循环重型肝炎病人血清实验 56
4.1.7 EBLSS肝细胞的活力观察 56
4.2 结果 57
4.2.1 EBLSS的建立 57
4.2.3 EBLSS循环液对培养大鼠肝细胞DNA合成的影响 58
4.2.2 EBLSS循环液中蛋白、尿素含量变化 58
4.2.5 EBLSS对利多卡因的转化代谢 59
4.2.4 EBLSS对安定的转化代谢 59
4.2.6 循环重型肝炎患者血清胆红素的变化 61
4.2.7 循环重型肝炎患者血清白蛋白含量分析 61
4.2.8 循环重型肝炎患者血清AFP含量分析 63
4.2.9 循环重型肝炎血清氨基酸变化 63
4.2.10 EBLSS功能评价实验对肝细胞的影响 64
4.3 讨论 66
4.3.1 体外生物人工肝系统的构建 66
4.3.2 EBLSS的生物合成功能 67
4.3.3 EBLSS的生物转化功能 68
4.3.4 EBLSS支持治疗重型肝炎的可能性 69
4.4 参考文献 70
5．生物人工肝支持系统对肝衰竭动物的支持作用 74
5.1.4 兔FHF模型的制备 75
5.1.3 实验动物 75
5.1.5 FHF兔的人工肝支持 75
5.1 材料与方法 75
5.1.2 人肝细胞的制备 75
5.1.1 主要试剂与材料 75
5.1.6 犬急性肝缺血模型的制备 77
5.1.7 FHF犬的人工肝支持方法与观察指标 77
5.1.8 EBLSS循环后肝细胞活力观察 78
5.2 结果 79
5.2.1 FHF兔存活时间 79
5.2.2 FHF兔主要生化指标的变化 79
5.2.3 FHF兔肝组织病理改变 79
5.2.4 人工肝支持犬的存活时间 82
5.2.5 实验犬的生命征变化 82
5.2.7 实验犬血乳酸浓度的动态观察 83
5.2.6 实验犬血氨浓度的动态观察 83
5.2.8 EBLSS循环过程肝细胞活力变化 85
5.3 讨论 85
5.3.1 EBLSS对化学药物诱导FHF兔的支持作用 85
5.3.2 EBLSS对急性肝缺血模型犬肝功能的代偿作用 86
5.3.3 EBLSS的完善及其用于肝衰竭治疗的前景 87
5.4 参考文献 89
6．小结 93
7．综述一：肝细胞的分离、培养与应用研究 96
7.1 肝细胞的分离技术 97
7.2 肝细胞的原代培养 99
7.3 肝细胞的传代培养 102
7.4 培养肝细胞的应用研究 105
7.4.1 肝炎病毒的感染与培养 105
7.4.2 生物型人工肝支持系统 105
7.4.4 基因治疗 106
7.4.3 肝细胞移植 106
7.5 结语 107
7.6 参考文献 107
8．综述二：生物人工肝及其治疗急性肝衰竭的研究进展 111
8.1 生物人工肝的历史回顾 112
8.1.1 早期人工肝支持系统 112
8.1.2 生物（混合）人工肝系统 113
8.2 生物人工肝的肝细胞选择 114
8.3 生物人工肝的肝细胞培养 116
8.4 生物人工肝的体外循环装置 117
8.5 混合型生物人工肝的现状 119
8.6 生物人工肝对肝衰竭动物的支持作用 121
8.7 生物人工肝的临床应用及意义 122
8.8 参考文献 124
英文缩写与简写词 129