目录 1
实验室规则 1
生物化学实验室规则 1
实验室安全及防护 2
生物化学实验基本操作 4
第一篇 生物化学与分子生物学技术 7
第一章 分光光度技术 7
第一节 基本原理 7
第二节 仪器的结构 9
第三节 常见分光光度计 9
第二章 层析技术 12
第一节 吸附层析 13
第二节 离子交换层析 14
第三节 凝胶层析 17
第四节 亲和层析 22
第三章 电泳技术 24
第一节 电泳的基本原理 24
第二节 醋酸纤维素薄膜电泳 26
第三节 琼脂糖凝胶电泳 27
第四节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 28
第五节 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 31
第六节 等电聚焦电泳 32
第七节 二维聚丙烯酰胺凝胶电泳 32
第一节 基本原理 34
第四章 离心技术 34
第二节 离心机的主要构造和类型 35
第三节 制备性超速离心的分离方法 38
第五章 分子生物学技术 41
第一节 DNA体外重组技术 41
第二节 PCR扩增技术 48
第三节 核酸分子杂交 52
第二篇 生物化学与分子生物学实验 58
第六章 蛋白质定量测定实验 58
实验1 双缩脲法测定蛋白质含量 59
实验2 Folin-酚测定蛋白质含量 59
实验4 紫外分光光度法测定蛋白质含量 61
实验3 考马斯亮兰法测定蛋白质含量 61
第七章 层析技术实验 64
实验5 血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定 64
实验6 葡聚糖凝胶分离蓝葡聚糖和溴酚蓝 66
实验7 葡聚糖凝胶分离血红蛋白和二硝基氟苯（DNP）-胰糜蛋白酶混合液 67
实验8 离子交换层析分离混合氨基酸 68
第八章 电泳实验 70
实验9 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 70
实验10 血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 72
实验11 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清乳酸脱氢酶同工酶 73
实验12 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定蛋白质相对分子质量 75
实验13 等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点 78
实验14 单向定量免疫电泳（火箭电泳） 80
实验15 影响酶活性的因素 82
第九章 酶学实验 82
实验16 蔗糖酶的专一性 83
实验17 pH值对酶促反应速度的影响 85
实验18 温度对酶促反应速度的影响 88
实验19 底物浓度对酶促反应速度的影响——碱性磷酸酶米氏常数的测定 89
实验20 抑制剂对酶促反应速度的影响 91
实验21 酶的提取及比活性测定 93
第十章 物质代谢实验 99
实验22 胰岛素对血糖含量的影响 99
实验23 邻甲苯胺法测血糖含量 100
实验24 糖酵解中间产物的鉴定 101
实验25 血清中丙氨酸转氨酶（ALT）活性的测定 103
实验26 血清脂类薄层层析 104
实验27 血清总胆固醇酶法测定 105
实验28 血清三酰甘油含量测定 106
实验29 血清高密度脂蛋白酶法测定 107
实验30 血清过氧化脂质（LPO）含量测定 108
第十一章 核酸实验 110
实验31 核糖核酸的提取 110
实验32 核糖核酸的测定 111
实验33 脱氧核糖核酸提取 111
实验34 脱氧核糖核酸的测定 112
第十二章 分子生物学实验 114
实验35 真核细胞DNA的制备与定量 114
实验36 真核细胞总RNA的提取与鉴定 115
实验37 大肠杆菌感受细胞的制备及转化 117
实验38 质粒DNA的提取 118
实验39 DNA的限制性酶切反应 120
实验40 目的DNA片段的回收 121
实验41 DNA重组实验 122
实验42 DNA琼脂糖凝胶电泳 123
实验43 PCR基因扩增 124
实验44 Southern杂交分析 127
实验45 Northern杂交分析 131
实验46 Western免疫印迹 133
第三篇 研究性实验 136
实验47 RT-RCR 136
实验48 亲和层析纯化胰蛋白酶 137
实验49 重组蛋白质包涵体的复性 138
第四篇 相关技术 140
一、盐析法 140
二、膜分离技术 140
三、细胞培养技术 141
四、酵母双杂交技术 142
附录 144
一、硫酸铵饱和度的常用表 144
二、实验室常用酸碱比重和浓度 146
三、缓冲液的配制 146
四、离心机转速与离心力的换算 151
五、常用蛋白质分子质量标准参照物 152
六、常用核酸蛋白质常数 152
七、部分仪器的使用及注意事项 153