实验部分 1
一、蛋白质分子量和等电点的测定 1
实验一（1）用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量 1
实验一（2）用凝胶等电聚焦法测定蛋白质等电点 8
二、蛋白质N-末端的测定 22
实验二（1）用DNP-氨基酸聚酰胺薄膜层析法测定胰岛素N-末端 23
实验二（2）用DNS-氨基酸聚酰胺薄膜层析法测定胰岛素N-末端 30
附聚酰胺薄膜的制备 38
三、异常血红蛋白分子的检测和分析 40
实验三（1）用混合淀粉凝胶电泳法检测异常血红蛋白 45
实验三（2）用虹吸式淀粉板电泳法分离纯化异常血红蛋白 50
实验三（3）用肽链解离试验分析异常血红蛋白亚基特征 54
实验三（4）用种间分子杂交法鉴定和分析异常血红蛋白亚基的异常 58
四、蛋白质的亲和层析 68
实验四（1）用分离纯化巯基蛋白的亲和层析法提纯巯基酶 70
实验四（2）亲和层析洗脱流出液中巯基酶的活力测定 78
五、蛋白质的放射性同位素标记 87
实验五氯胺T法碘标记蛋白质 88
六、RNA碱基组成分析 92
实验六（1）RNA的碱水解 93
实验六（2）单核苷酸的离子交换树脂柱层析分离 96
实验六（3）单核苷酸的鉴定及RNA碱基组成分析 104
七、DNA的（G＋C）％测定 110
实验七（1）DNA的酶水解 111
实验七（2）脱氧单核苷酸的纸电泳分离及（G＋C）％测定 113
八、枯草杆菌pUB110质粒DNA的提取和若干分子特性的鉴定 121
实验八（1）pUB110质粒DNA的提取 122
实验八（2）pUB110质粒DNA的纯化 127
实验八（3）pUB110质粒DNA制品的纯度鉴定和限制性内切酶EcoRI的酶切 132
实验八（4）pUB110质粒DNA分子的电子显微镜观察（示范实验） 139
九、大肠杆菌ColEl质粒DNA的快速提取 147
实验九（1）快速酚法 149
实验九（2）碱性SDS法附酚重蒸法 166
十、从鸡蛋壳膜中制备溶菌酶结晶 168
实验十（1）溶菌酶的提取、纯化和结晶 169
实验十（2）溶菌酶纯化过程中各步骤的分析测定 177
十一、酸性磷酸酯酶的动力学性质的分析 183
实验十一（1）进程曲线的制作和初速度的测定 184
实验十一（2）pH～活性曲线的制作和酸碱稳定性试验 187
实验十一（3）温度～活性曲线的制作和热稳定性试验 192
实验十一（4）米氏常数（Km）和最大反应速度（Vm）的测定 196
实验十一（5）氟化钠及磷酸盐的抑制作用——抑制类型的判断和抑制剂常数（Ki）的测定 202
十二、酶的固定化与菌体细胞的固定化技术 210
实验十二（1）5′-磷酸二酯酶的固定化 211
实验十二（2）产α-半乳糖苷酶菌体细胞的固定化 217
十三、正交试验法在实验条件选择中的应用——考马斯亮蓝染色测定蛋白质浓度的条件选择 225
实验十三考马斯亮蓝染色测定蛋白质浓度的实验条件选择 226
附录部分 234
一、常用仪器的使用方法 234
二、生物化学实验用缓冲液的配制方法 240
三、常用数据 253