第一编 概论 1
第一章 生命大分子物质的制备 1
第一节 材料的选择与处理 2
一、材料的选择 2
二、材料的处理 2
第二节 确立测定方法 4
一、目的与要求 4
二、常用的测定方法 5
第三节 细胞的破碎 6
一、机械破碎 6
二、溶胀和自溶 7
三、化学处理 8
四、生物酶降解 8
第四节 抽提 9
一、抽提的含义 9
二、抽提有效成分的影响因子 9
第五节 浓缩 14
一、沉淀法 14
二、吸附法 14
三、超过滤法 14
四、透析浓缩法 14
五、减压蒸馏浓缩法 15
六、冰冻干燥法 15
第六节 纯化方案的设计与评价 16
一、纯化方案的设计 17
二、纯化方案的评价 17
第七节 有效成分纯度和性质的分析 20
第八节 实例 21
一、制备高纯度人转铁蛋白的快速方法 21
二、叶绿体的提取与4.5SRNA的制备 21
三、细菌质粒DNA的提取 22
思考题 22
第二编 纯化方法 24
第二章 沉淀法 24
第一节 基本原理 24
第二节 沉淀的类型与操作 25
一、盐析法 25
二、有机溶剂沉淀法 33
三、蛋白质沉淀剂 35
四、聚乙二醇沉淀作用 36
五、选择性沉淀法 36
六、结晶 37
第三节 实例 38
思考题 39
第三章 吸附层析 40
第一节 吸附柱层析 42
一、常用术语 42
二、基本原理 44
三、吸附剂 44
四、洗脱剂 48
五、层析柱的制备与层析操作 49
六、应用与实例 52
第二节 薄层层析 55
一、操作及注意事项 57
二、实例 63
第三节 聚酰胺薄膜层析 68
一、基本原理 69
二、应用 70
思考题 76
第四章 离子交换层析 78
第一节 基本原理 78
第二节 离子交换剂的分类及性质 81
一、分类 82
二、性质 86
第三节 离子交换剂与缓冲液的选择 96
一、离子交换剂的选择 96
二、缓冲液的选择 99
第四节 操作 99
一、离子交换剂的处理、再生和转型 99
二、分离物质的交换 101
三、物质的洗脱与收集 102
第五节 应用 105
一、制备、纯化生命物质 105
二、测定蛋白质的等电点 110
思考题 111
第五章 凝胶过滤 113
第一节 凝胶的分类及性质 113
一、葡聚糖凝胶 113
二、琼脂糖凝胶 117
三、聚丙烯酰胺凝胶 121
四、Sephacryl 122
第二节 基本原理 123
第三节 操作 127
一、凝胶的选择和处理 127
二、凝胶柱的制备 129
三、加样与洗脱 130
四、凝胶柱的再生及保存 135
第四节 应用 138
一、脱盐和浓缩 138
二、分离生命物质 138
三、去热源物质 139
四、测定分子量 140
五、其它 145
思考题 146
第六章 亲和层析 147
第一节 基本原理 148
第二节 操作 151
一、基质的选择 151
二、配体的选择 152
三、亲和吸附剂的制备 153
四、特异吸附 158
五、分离大分子物质 160
六、亲和层析柱的再生 162
第三节 提高吸附剂的操作容量 162
一、在配体和基质之间引入“手臂”（arms） 162
二、增加配体取代的程度 164
三、配体与基质以最少的键连接 164
四、基质多孔性的影响 166
五、其它 167
第四节 应用 167
一、纯化大分子物质 167
二、研究酶的结构与功能 172
思考题 173
第七章 聚焦层析 174
第一节 基本原理 174
一、多缓冲剂和多缓冲交换剂 174
二、聚焦层析原理 176
第二节 操作 179
一、多缓冲剂的选择 181
二、多缓冲交换剂用量的确定 181
三、多缓冲交换剂的处理 181
四、样品的准备 183
五、上样和洗脱 183
六、样品中多缓冲剂的去除 184
第三节 应用 184
一、分离模型蛋白质 185
二、分离复杂的物质 186
三、鉴定某些酶的性质 188
思考题 189
第八章 气相色谱 190
第一节 基本原理 191
一、常用术语 191
二、原理 193
第二节 气相色谱仪的构造 195
一、气源、载气流速的控制和测量 196
二、进样系统 197
三、恒温室 198
四、色谱柱 198
五、检定器 204
第三节 操作 206
一、操作要点 206
二、条件的选择 207
第四节 定性和定量分析 207
一、定性分析 207
二、定量分析 209
第五节 应用 214
一、分析蛋白质和氨基酸 215
二、分析核酸 215
三、分析糖类物质 217
四、分析脂肪酸 217
五、分析农药 218
思考题 218
第九章 高效液相色谱 219
第一节 基本原理 219
第二节 应用 223
一、定性和定量分析 224
二、测定酶活性 225
三、测定蛋白质分子量 226
四、分离液酸和蛋白质 228
五、附表：部分色谱柱的性能及有关参数 230
思考题 235
第十章 固定化酶与微生物 236
第一节 制备方法 237
一、固定化酶 237
二、固定化微生物 241
第二节 制品的性质 242
一、酶的相对活力 242
二、活力曲线与最适pH 245
三、稳定性 249
四、米氏常数 251
五、其它 252
第三节 应用 253
一、工业方面 253
二、医学方面 255
三、生化分析方面 256
四、应用实例 259
思考题 262
第三编 鉴定方法 264
第十一章 生物传感器 264
第一节 基本原理 265
一、离子选择电极 265
二、生物活性材料 267
第二节 类型与制备 268
一、类型 268
二、制备 269
第三节 应用 270
一、工业方面 270
二、医学方面 271
三、环境监测方面 272
思考题 274
第十二章 电泳 275
第一节 基本原理 276
第二节 纸电泳 279
一、材料准备 280
二、点样 282
三、电泳 284
四、烘干 284
五、显色 284
六、定量测定 284
第三节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 287
一、基本原理 288
二、操作 295
第四节 琼脂电泳 321
一、基本原理 321
二、操作 322
三、应用实例 324
第五节 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 324
一、基本原理 325
二、操作 326
第六节 聚丙烯酰胺凝胶电聚焦 327
一、基本原理 328
二、两性电解质的理化性质 329
三、两性电解质的pH范围与用量的选择 330
四、测定蛋白质等电点的操作 331
第七节 印迹法（转移电泳） 335
一、基本原理 336
二、操作及注意事项 337
三、应用 340
思考题 342
第十三章 免疫分析 344
第一节 抗体的性质、制备及纯化 344
一、抗体的性质 344
二、多克隆抗体的制备 345
三、单克隆抗体的制备 353
四、抗体的检测 358
五、抗体的纯化 362
第二节 抗原抗体反应 366
一、标记 366
二、分析方法 373
思考题 385
第十四章 聚合酶链式反应 388
第一节 原理 388
一、反应物与最适条件 389
二、PCR原理 391
第二节 操作 393
一、试剂的配制 393
二、步骤 394
第三节 应用 396
一、检测基因的分离和表达 396
二、检测癌症 397
思考题 397
附录 399
一、常用数据 399
二、常用缓冲液的配制 414
参考文献 423