第一章 载体 1
第一节 对载体的要求 1
第二节 无机载体材料 1
一、硅胶 2
二、可控孔玻璃 3
三、其他 5
第三节 天然有机高聚物 6
一、纤维素 6
二、琼脂糖凝胶 7
三、葡聚糖凝胶 8
四、脂质体 9
五、用于膨胀床技术的载体材料 9
六、微生物表面呈现 9
七、其他 10
第四节 合成有机高聚物 10
一、丙烯酰胺衍生物 10
（一）聚丙烯酰胺凝胶 10
（二）Trisacryl 11
（三）聚丙烯酰胺-琼脂糖凝胶 12
（四）吖内酯颗粒 13
二、甲基丙烯酸衍生物 14
（一）聚甲基丙烯酸羟乙酯 14
（二）TSK Toyopearl凝胶 14
（三）Eupergit 14
三、聚苯乙烯类 17
（一）聚苯乙烯板 17
（二）灌注色谱填料 18
四、聚四氟乙烯 18
五、其他 19
第五节 膜 19
第六节 磁性微球 19
（一）机械分散或喷珠法 20
（二）有机单体聚合涂布于磁流体表面法 20
（三）渗磁法 21
（四）大分子稳定铁氧化物溶胶法 21
（五）天然磁颗粒 22
参考文献 22
第二章 活化方法 25
第一节 概述 25
第二节 实验程序 26
一、活化氨基的方法 26
（一）溴化氰法 26
（二）N-羟基琥珀酰亚胺酯活化法 29
（三）羰基二咪唑活化法 34
（四）还原氨化法 37
（五）FMP活化法 44
（六）碳二亚胺法 45
（七）有机磺酰氯法 49
（八）二乙烯基砜法 51
（九）吖内酯法 53
（十）氰尿酰氯 57
二、巯基活化方法 60
（一）碘乙酰和溴乙酰活化方法 60
（二）马来酰亚胺法 61
（三）吡啶二硫化物 64
（四）二乙烯基砜 66
（五）环氧法 67
（六）TNB-硫醇活化法 67
三、羰基活化法 69
（一）酰肼活化法 69
（二）还原氨化 72
四、羟基活化方法 74
（一）环氧化物（二环氧乙烷）活化方法 74
（二）二乙烯基砜 76
（三）氰尿酰氯 76
五、活泼氢的活化 76
（一）偶氨反应 76
（二）曼尼期缩合法 80
六、光交联反应 84
参考文献 86
第三章 生物分子的固定化 89
第一节 “手臂” 89
一、3.3＇-二氨丙基亚胺 90
二、1,6-二氨基已烷 92
三、6-氨基已酸 93
四、乙二胺 94
（一）EDA与固定化6-AC反应 94
（二）EDA通过转氨基反应对聚丙烯酰胺凝胶进行衍生化 95
五、戊二醛 95
六、氨化环氧化物 96
七、酸酐 96
八、对β-硫酸酯乙砜基苯胺 97
九、氨基酸 98
十、封闭 98
第二节 小分子配基的固定化 99
一、糖类 99
（一）蜜二糖 99
（二）乳糖 100
（三）甘露糖 102
（四）肝素 102
二、酶抑制剂 103
（一）对氨基苯甲脒 103
（二）抑胃肽A 104
（三）赖氨酸 105
三、生物素及类似物 105
四、染料 107
（一）Cibacron Blue F3GA 107
（二）酚红和百里酚蓝 108
五、金属离子螯合剂 109
（一）亚氨基二乙酸 110
（二）三羧甲基乙二胺 110
六、疏水性配基 111
（一）辛胺 112
（二）苄胺 112
七、药物 112
（一）氨甲蝶呤 112
（二）阿普洛尔 114
（三）17β-雌二醇 114
（四）四氢大麻酚 118
（五）乙炔基甾体 119
八、巯基还原剂 119
（一）N-乙酰高半胱氨酸 120
（二）二氢硫辛酰胺 120
九、组氨酸 121
十、硼酸衍生物 121
第三节 蛋白质的固定化 121
一、鸡卵粘蛋白 121
二、亲和素、链亲和素及亲和素亚基 121
（一）CNBr活化法固定亲和素或链亲和素 122
（二）单亚基（单价）亲和素的制备 123
三、凝集素 123
（一）ConA 固定于CNBr活化的Sepharose 4B 124
（二）ConA固定于戊二醛活化的磁性微球 124
四、细胞因子 124
第四节 固定化酶 125
一、5＇-磷酸二酯酶 126
二、TPCK-胰蛋白酶 126
三、胃蛋白酶 127
四、木瓜蛋白酶 127
五、金黄色葡萄球菌V8蛋白酶 128
六、β-D-半乳糖苷酶 128
七、电化学聚合高分子固定法 128
第五节 肽类抗原、抗体及免疫球蛋白结合蛋白的固定化 129
一、肽类抗原 129
（一）通过氨基或羧基进行肽的偶联 130
（二）通过巯基进行偶联 131
（三）通过活性氢偶联肽 131
二、抗体 132
（一）抗志贺氏菌抗血清直接偶联于醛基磁性微球 135
（二）EDC法偶联甲状腺素（T4）抗体 135
（三）抗体定位固定 135
（四）抗体偶联于聚苯乙烯上 137
（五）抗体与脂质体偶联 140
（六）基因工程单链抗体的固定化 140
三、免疫球蛋白结合蛋白 141
（一）蛋白A 141
（二）蛋白G 141
（三）蛋白A/G 141
（四）蛋白B 142
（五）Mannan结合蛋白 142
第六节 核酸的固定化 143
一、吸附于固相载体上 143
二、化学偶联 143
（一）重氮法偶联单链DNA 143
（二）碳二亚胺偶联寡聚脱氧胸苷 145
（三）过碘酸氧化法固定RNA 146
三、亲和交联法 147
第七节 诊断与治疗用药物的固定化 147
第八节 细胞的固定化 147
第九节 亲和交联法 148
一、第二抗体-第一抗体系统 148
二、蛋白A-抗体系统 149
三、生物素-亲和素系统 149
四、配位交联法 149
五、其他亲和交联系统 149
六、两个通过多重亲和交联与标记系统进行基因分离与分析的例子 150
（一）固定化磁性核酸扩增检测 150
（二）转基因动物基因组中特定基因的回收 151
参考文献 151
第四章 示踪技术 155
第一节 活化程度和固定化配基密度的测定 155
一、用茚三酮测量活化的程度 155
二、用双辛可宁酸检测固定化的蛋白质 157
三、用2.4.6-三硝基苯磺酸盐定量测试氨基、酰肼或者巯基 158
四、用双辛可宁酸检测酰胺功能团 159
五、对固定化亲合素或链亲和素上生物素结合位点的检验 160
六、用考马斯亮蓝染料定量检测固定化蛋白质 161
七、用不同的分析方法测量偶联的配基 161
八、固定化配基的直接吸收扫描 162
九、用埃尔梅试剂测量巯基基团 163
第二节 亲和技术 164
一、小柱的装填和使用 165
二、大柱的装填与使用 167
三、缓冲液和流速的考虑 168
（一）结合缓冲溶液 168
（二）非特异作用 170
（三）洗脱方法 171
（四）流速 173
四、样品 174
五、测量固定化配基的容易和活性 175
（一）总结合容易的测量 176
（二）比活性的测量 177
参考文献 177
第五章 固定化生物分子的应用 178
第一节 亲和分离系统 178
一、亲和色谱法 178
（一）基本流程 178
（二）配基的选择 179
（三）亲和色谱方法 179
（四）亲和色谱新进展 182
（五）具体应用实例 188
二、利用亲和吸附剂特异性地除去体系中的污染物质 192
（一）去污剂 192
（二）脂类与脂蛋白 193
（三）内毒素 194
（四）蛋白酶类 195
（五）血液净化 196
（六）其他 197
三、细胞及其组分的亲和分离 197
第二节 固相免疫分析 199
一、基本概念与原理 199
二、标记固相免疫分析的技术关键 203
（一）抗体 203
（二）抗体的固相比 205
（三）标记 208
（四）一些实用中的相关问题 213
三、其他固相标记结合分析 215
第三节 固定化酶固定化细胞与生物反应器 215
一、在食品、制药等轻化工领域的应用 216
二、临床治疗方面的应用 220
三、化学分析方面的应用 221
四、环境监测与治理 221
五、生化基础研究 221
（一）用固定化TPCK-胰蛋白酶水解胰岛素β-链 222
（二）用固相胃蛋白酶水解IgG制备F（ab）2＇ 222
（三）用连续的固相酶柱进行DNA序列分析 223
六、新能源的开发 224
第四节 载体药物 224
一、聚合物修饰 225
二、凝胶包埋 226
三、微球制剂 226
四、脂质体 227
五、导向药物 228
第五节 载体试剂及生物大分子的固相合成 229
一、固定化巯基还原剂 229
（一）肽的还原 229
（二）溶菌酶与核糖核酸A的还原 229
二、生物大分子的固相合成 230
三、多肽的固相序列分析 231
第六节 生物传感器 233
一、生物传感器的组成和工作原理 233
二、生物传感器中配基固定化技术 234
三、换能器 235
四、生物传感器的发展和应用 236
第七节 固定化生物分子的一些其他用途 241
参考文献 242
基本参考文献 251