目录 1
第一章 序言 1
一、蛋白质顺序分析的意义 1
二、历史回顾与现状 2
三、展望 10
第二章 蛋白质顺序测定的一般方法、步骤和基本战略 14
一、蛋白质的肽链结构 14
（一）蛋白质的结构单位——氨基酸 14
（二）蛋白质顺序的含意 17
二、样品的纯度要求 18
三、顺序测定的一般方法和步骤 19
（一）顺序测定前的准备 19
（二）二硫键的断裂 19
（三）顺序测定的一般方法和步骤 21
四、顺序测定的基本战略 22
（一）氨基酸自动分析仪的一般构造及功能 25
二、氨基酸自动分析的原理及有关仪器简介 25
一、引言 25
第三章 氨基酸组成分析 25
（二）氨基酸自动分析的原理 28
三、蛋白质样品的水解处理 33
（一）盐酸水解法 34
（二）磺酸水解法 37
（三）碱水解法 39
（四）酶水解法 39
四、氨基酸组成分析的误差纠正 39
五、氨基酸残基数的计算 40
第四章 蛋白质的裂解 44
一、引言 44
二、蛋白质的酶裂解 44
（一）简述 44
（二）几种常用的肽链裂解酶 45
（三）近年来发现的几种高特异性的肽链内切酶 50
（四）实验方法 52
三、蛋白质的化学裂解 54
（一）溴化氰裂解 55
（二）羟胺裂解 57
（三）色氨酸位点的裂解 59
（四）部分酸水解 61
第五章 肽段的分离纯化 65
一、引言 65
二、凝胶过滤层析 65
（一）基本原理 65
（二）凝胶的类型 67
（三）实验方法 69
（一）一般原理 74
三、离子交换层析 74
（二）离子交换剂的种类 75
（三）实验方法 80
四、肽的薄膜层析分离 83
（一）基本原理和一般情况介绍 83
（二）实验方法 85
五、SDS凝胶电泳 86
（一）FDNB分析法 89
一、N末端测定 89
第六章 末端氨基酸残基的测定 89
（二）DNS析法 95
（三）Fdman降解法 97
（四）DABITC法 97
（五）氨肽酶法 97
（六）N末端氨基受封闭时的测定 98
二、C末端测定 102
（一）肼解法 102
（三）C末端选择性氚标记法 104
（二）乙内酰硫脲法 104
（四）减数C末端测定 105
（五）还原法 106
（六）羧肽酶法 106
第七章 手工微量顺序测定技术 111
一、手工Edman化学降解法 111
（一）原理 111
（二）实验方法 113
（三）PTH-氨基酸的鉴定 114
二、DNS-Edman测顺序法 120
三、减数Edman测顺序法 121
四、DABITC/PITC双偶合法 122
（一）引言 122
（二）原理 123
（三）实验方法 124
五、氨肽酶降解法 129
第八章 固相顺序分析技术 133
一、载体的选择及制备 133
（一）载体的选择 133
（二）载体的制备 136
二、固定蛋白质或多肽的原理及方法 137
（一）对苯二异硫氰酸（DITC）法 137
（二）高丝氨酸内酯法 141
（三）水溶性碳二亚胺（FDC）法 144
三、双偶合法在手工固相顺序测定中的应用 146
（一）用EDC方法固定胰岛素A链 146
（三）TLC鉴定及结果 147
（二）双偶合手工固相法顺序测定 147
四、固相法测顺序的优缺点 149
（一）固相法的优缺点 149
（二）固相法测顺序的战略运用 149
第九章 蛋白质自动顺序分析仪 155
一、自动液相顺序分析仪 155
（一）引言 155
（二）液相顺序仪的一般构造原理 156
（三）蛋白质和小肽样品在液相顺序仪中的降解 157
（四）携带体Polybrene引入反应杯 158
二、自动固相顺序仪 159
（一）引言 159
（二）固相顺序仪的一般构造原理 159
（三）固相顺序仪的微量顺序分析 161
三、气相顺序仪 162
（一）引言 162
（二）气相顺序仪的一般构造原理 165
一、引言 167
二、高效液相色谱仪的一般构造原理 167
第十章 高效液相色谱在蛋白质顺序分析中的应用 167
三、利用高效液相色谱技术分离纯化蛋白质和多肽 172
（一）一般说明 172
（二）应用示例 175
四、Edman降解产物的高效液相色谱 180
（一）PTH-氨基酸高效液相色谱 180
（二）DABTH-氨基酸高效液相色谱 185
（三）DNS-氨基酸的超微量高效液相色谱 186
一、引言 189
第十一章 顺序分析技术在异常血红蛋白结构研究中的应用 189
二、异常血红蛋白化学结构分析 194
（一）血液标本的采集和溶血液的制备 194
（二）珠蛋白的制备 195
（三）异常肽链的分离及其氨乙基化 195
（四）胰蛋白酶水解 196
（五）酶解片段肽的分离 199
（六）异常肽的二次酶解和分离 203
（七）不溶性胰蛋白酶酶解肽的处理 203
（八）异常肽的氨基酸组成分析和氨基酸顺序测定 204
附录一 常用英文名字缩写 205
附录二 部分试剂和溶剂的纯化 206
附录三 氨基酸的一些物理常数 207
附录四 缓冲溶液的配制 209
（一）几种特殊缓冲液的配制 209
（二）常用缓冲液的配制 209
（三）标准缓冲液的配制 214
附录五 常用数据表 215
（一）某些有机溶剂的主要物理常数 215
（三）常用固态化合物的当量浓度（或md浓度）配制参考表 216
（二）实验室中常用酸碱的比重和浓度的关系 216
（四）常用酸碱的强度 217
附录六 硫酸铵饱和度常用表 218
（一）调整硫酸铵溶液饱和度计算表 218
（二）调整硫酸铵溶液饱和度计算表 218
（三）不同温度下的饱和硫酸铵溶液 219
附录七 冷却剂和干燥剂 220
（一）冷却剂 220
（二）干燥剂 220