上篇 DNA扩增技术 3
第一章 DNA的性质 3
第一节 DNA的理化性质 4
一、DNA的紫外吸收 4
二、DNA的沉降特性 6
三、DNA的变性与复性 7
第二节 DNA的复制 11
一、DNA复制的基本特点 11
二、DNA复制中的酶和蛋白因子 12
三、DNA复制过程 20
四、DNA的损伤与修复 21
第二章 DNA扩增常用的克隆载体 26
第一节 质粒 27
第二节 噬菌体载体 30
一、？噬菌体载体 31
二、单链噬菌体载体 33
三、粘性质粒载体 35
第三节 动物病毒载体 35
一、SV40载体 36
二、痘苗病毒载体 37
第四节 细菌菌株 38
一、细菌菌株的生长和保存 39
二、细菌菌株 40
第三章 DNA扩增——PCR技术 42
第一节 DNA的一般制备与扩增技术概述 43
一、DNA的一般制备方法 43
二、DNA的传统扩增技术 44
一、PCR基本原理 51
第二节 PCR原理与特点 51
二、PCR的特点 53
第三节 Taq DNA聚合酶 54
一、Taq聚合酶的性质 55
二、影响酶活性的因素 58
第四节 PCR基本技术 61
一、设备与试剂 61
二、模板DNA提取方法 64
三、PCR反应体系 69
四、PCR操作步骤 69
第五节 PCR具体实施中的有关问题 71
一、模板选择 71
二、引物的设计与合成 72
三、引物合成后的处理 73
四、引物的纯化 74
五、Mg2+浓度的影响 79
六、dNTP的浓度 79
七、循环参数 79
八、扩增平台期 81
九、标本的污染和假阳性的出现 81
第六节 DNA扩增仪及基因诊断技术自动化模式 83
一、DNA扩增仪 83
二、基因诊断技术自动化模式 87
第七节 PCR试剂盒 88
一、美国PE公司试剂盒 89
二、济南军区总医院HPV1？、HPV1？试剂盒 90
第一节 琼脂糖凝胶电泳 95
一、琼脂糖凝胶的制备 95
第四章 DNA扩增产物的常用检测方法 95
二、琼脂糖凝胶中DNA的染色与脱色 100
三、微型凝胶电泳 101
四、酶切DNA片段的琼脂糖凝胶电泳 101
五、从琼脂糖凝胶中回收DNA 105
六、碱性琼脂糖凝胶电泳 109
七、脉冲电场凝胶电泳 110
八、Southern吸印法 113
第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 116
一、凝胶聚合原理 117
二、垂直板型电泳 118
三、从聚丙烯酰胺凝胶中分离DNA片段 123
四、酶切后DNA片段的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 124
一、聚丙烯酰胺凝胶分离链 126
第三节 分离链的凝胶电泳 126
二、琼脂糖凝胶分离链 128
三、变性梯度凝胶电泳 130
第四节 离子交换层析技术 134
一、离子交换剂种类 135
二、操作步骤 136
第五节 用标记探针检测DNA 140
一、探针的选择 140
二、探针的末端标记 142
三、标记的探针杂交 143
四、斑点杂交检测DNA扩增产物 146
第六节 PCR扩增产物的直接测序 148
一、化学断裂法 149
二、Taq DNA聚合酶直接测序 150
三、三引物法 152
四、不对称PCR制备单链模板DNA测序 153
五、GAWTS法 155
六、测序反应的自动化 155
七、高效液相色谱法（HPLC） 157
第七节 DNA酶免疫试验 157
一、DEIA的基本原理 158
二、DEIA的特异性与敏感性 159
三、PCR—DEIA操作方法 163
第五章 PCR技术进展 167
第一节 固定PCR 167
第二节 重组PCR 168
第三节 引物标记PCR 171
一、DNA—PCR定量 174
第四节 定量PCR 174
二、mRNA-PCR定量 175
第五节 反向PCR 179
第六节 逆转录PCR 182
一、cDNA的合成 182
二、灭活逆转录酶 183
三、PCR 183
四、产物分析 184
第七节 竞争性PCR 184
一、引物竞争PCR 184
二、模板竞争PCR 186
第八节 多重引物PCR 188
第九节 等位特异PCR 189
第十节 简并引物PCR 191
二、错误配对PCR 193
第十一节 其他衍生的PCR技术 193
一、加端PCR 193
三、一步扩增法 194
四、体外转录放大系统 195
五、Qβ复制酶系统 197
六、 套式”PCR 197
七、不完全配对PCR 198
八、PCR—单链构型多态性分析 199
第六章 常用的试剂和基本技术 202
第一节 试剂的配制 202
一、有机试剂的配制 202
二、缓冲液和溶液的配制 202
三、抗生素的配制 207
五、常用凝胶载样缓冲液的配制 208
四、部分酶的配制 208
第二节 基本技术 209
一、玻璃与塑料器皿的处理 209
二、透析袋的制备 210
三、塑料袋封口 210
四、DNA抽提及沉淀 210
五、放射自显影及凝胶拍照 212
六、限制性内切酶及其应用 215
七、DNA含量测定 220
八、核酸保存技术 222
九、实验室安全 223
下篇 DNA扩增的医学应用 229
第七章 病原体DNA的检测 229
第一节 PCR在病毒学领域中的应用 230
一、乙型肝炎病毒 234
二、人乳头瘤病毒 256
三、丙型肝炎病毒 274
四、人巨细胞病毒 282
五、人免疫缺陷病毒 286
六、EB病毒 293
七、腮腺炎病毒 297
第二节 PCR在检测细菌中的应用 299
一、VT毒素大肠杆菌 299
二、痢疾性腹泻病原菌 300
三、结核杆菌及其他分枝杆菌 304
第三节 其他病原微生物 310
一、沙眼衣原体 310
二、肺炎支原体 313
三、立克次体 315
第八章 DNA扩增技术在免疫学中的应用 324
第一节 细胞因子 324
一、检测通则 327
二、IL-2 327
三、IL-3 330
四、IL-4 334
五、IL-6 338
六、其他细胞因子 340
第二节 HLA基因分型 346
一、HLA基因结构简述 346
二、HLA-D区基因的特点 347
三、HLA-D区基因的PCR扩增检测 348
四、HLA配型在器官移植中的意义及发展趋势 352
一、T细胞受体 357
第三节 T细胞受体、免疫球蛋白及补体的研究 357
二、免疫球蛋白及补体 366
第四节 自身免疫性疾病 369
一、自身免疫性肝炎 370
二、风湿性关节炎 372
第九章 肿瘤相关基因的检测 377
第一节 原癌基因与癌基因 378
一、常见原癌基因、癌基因的特点 382
二、原癌基因、癌基因的激活方式 386
第二节 原癌基因、癌基因的一般检测方法 389
一、DNA转染实验 389
二、分子生物学与免疫学检测 391
第三节 原癌基因、癌基因的PCR检测 393
一、PCR检测的范围及特点 393
二、ras基因点突变的PCR检测 396
第四节 原癌基因、癌基因与恶性肿瘤 406
一、胃癌 407
二、肺癌 408
三、乳腺癌 409
四、结肠癌、直肠癌 411
五、宫颈癌 412
六、血液系统恶性肿癌 413
七、其他恶性肿瘤 414
第五节 抗癌基因 416
一、抗癌基因的生物学功能 417
二、抗癌基因的检测 419
三、Rb基因 421
四、P53抗癌基因 427
五、其他抗癌基因 443
第六节 原癌基因与心脑血管疾病 445
一、癌基因与高血压 446
二、癌基因与心肌肥厚 448
三、癌基因与动脉粥样硬化 451
第七节 其他肿瘤相关基因 453
一、慢粒白血病bcr-abl嵌合基因mRNA的PCR检测 453
二、B淋巴细胞瘤染色体重排 455
第十章 遗传病相关基因检测 460
第一节 地中海贫血的基因诊断 460
第二节 杜氏肌营养不良症 465
第三节 甲型血友病 468
第四节 苯丙酮尿症 470
第五节 性连锁鱼鳞病 471
第六节 Leber s视神经病 473
第七节 自毁容貌综合征 475
第八节 胎儿产前性别鉴定 476
第十一章 分子生物学及法医学应用 480
第一节 基因分离和基因表达的检测 480
一、基因分离 480
二、基因表达 482
第二节 突变体和重组体的构建 483
一、突变体的构建 484
二、重组体的构建 485
第三节 法医学应用 488
一、个体识别 488
二、性别鉴定 492
三、血缘关系的确定 494