1 酵母耐盐分子机制的研究现状 1
1.1 盐胁迫信号的传导途径 2
1.2 盐胁迫下酵母的平衡调节机制 5
1.3 酵母盐胁迫应答基因的转录应答模式 7
1.4 盐胁迫下酵母基因组的转录应答功能组 9
1.5 酵母耐盐机制的主要研究方法 10
1.6 酵母耐盐基因的研究在植物耐盐基因研究中的作用 11
1.7 展望 12
2 酵母耐盐分子生物学的常用研究方法与实践 14
2.1 酵母菌的培养 14
2.2 酵母菌菌种的保存 17
2.3 酵母基因组DNA的提取 18
2.4 酵母RNA的提取 22
2.5 酵母总RNA中DNA的去除 33
2.6 酵母总RNA的纯化 35
2.7 mRNA的分离 35
2.8 酵母质粒DNA的提取 37
2.9 酵母菌转化方法 37
2.10 酵母菌落PCR的方法 39
2.11 酵母菌耐盐性检测——Drop test方法 39
2.12 酵母菌耐盐性检测——生长曲线测定 40
2.13 酵母菌渗透调节剂甘油的含量测定 40
2.14 酵母菌渗透调节剂海藻糖的含量测定 41
3 盐胁迫下酿酒酵母和鲁氏酵母渗透平衡调节方式的研究 42
3.1 不同盐胁迫条件下酵母细胞内海藻糖含量的变化 43
3.2 盐胁迫下酿酒酵母和鲁氏酵母中的海藻糖对渗透平衡的调节方式 45
3.3 不同盐胁迫条件下酵母菌细胞内和细胞外甘油含量的变化 45
3.4 盐胁迫下酿酒酵母和鲁氏酵母中的甘油对渗透平衡的调节方式 50
4 渗透平衡调节基因ScGPD1的克隆及其在酿酒酵母中的超量表达对酵母耐盐性的影响 52
4.1 渗透平衡调节基因ScGPD1的克隆及核苷酸序列分析 54
4.2 渗透平衡调节基因ScGPD1的氨基酸序列及蛋白质结构分析 56
4.3 ScGPD1基因在离子调节缺陷型酿酒酵母菌株中的表达对酵母耐盐性的影响 58
4.4 ScGPD1基因在野生型酿酒酵母中的表达对酵母耐盐性的影响 60
5 离子平衡调节基因AtNHX1的克隆及其在酿酒酵母中的表达对酵母耐盐性的影响 64
5.1 离子平衡调节基因AtNHX1的克隆及其核苷酸序列分析 65
5.2 离子平衡调节基因AtNHX1的氨基酸序列分析 67
5.3 AtNHX1基因的表达调控 70
5.4 AtNHX1基因在渗透调节缺陷型酿酒酵母菌株中的表达对酵母耐盐性的影响 72
5.5 AtNHX1基因在野生型酿酒酵母菌株中的表达对酵母耐盐性的影响 74
6 渗透平衡调节基因ScGPD1与离子平衡调节基因AtNHX1在酿酒酵母中的共表达对酿酒酵母耐盐性的影响 78
6.1 ScGPD1与AtNHX1的双基因酵母表达载体的构建 79
6.2 ScGPD1与AtNHX1的双基因酵母表达载体转化酵母菌 80
6.3 酵母中ScGPD1与AtNHX1基因在转录水平上表达的检测 81
6.4 ScGPD1基因与AtNHX1基因在野生型酿酒酵母中的单独表达与共表达对酵母耐盐性的影响 82
7 酿酒酵母离子平衡调节基因ScHAL1的克隆及其对烟草耐盐性的影响 91
7.1 ScHAL1基因的克隆与核苷酸序列分析 92
7.2 HAL1基因的表达调控 94
7.3 ScHAL1基因植物表达载体的构建 96
7.4 ScHAL1基因转化烟草及转基因烟草的分子生物学检测 98
7.5 ScHAL1基因在烟草中的表达对烟草耐盐性的影响 102
7.6 ScHAL1基因在耐盐植物基因工程中的作用 105
8 鲁氏酵母盐诱导抑制性消减杂交文库的构建与盐胁迫应答基因EST表达谱的研究 108
8.1 鲁氏酵母盐诱导抑制性消减杂交文库的构建 111
8.2 鲁氏酵母盐胁迫应答ESTs表达谱的分析 114
参考文献 118