第一章 绪论 1
1 蛋白质定义与结构 1
2 蛋白质的一般理化性质 2
3 蛋白质分离纯化的目的和意义 5
4 蛋白质分离纯化的基本原则和策略 6
5 蛋白质分离纯化的基本过程 8
第二章 蛋白质样品的初级分离 13
1 制备蛋白质的原材料的选择和预处理 13
2 目标蛋白质的离心分离 16
3 沉淀分级 18
4 萃取 19
5 吸附 20
6 膜分离 21
第三章 蛋白质高效分离——层析法 23
1 离子交换层析 23
2 层析聚焦 31
3 分子排阻层析 35
4 羟基磷灰石层析 44
5 亲和层析 46
6 高效液相色谱 55
7 免疫亲和层析 62
第四章 分离纯化蛋白质的电泳分析 66
1 电泳的基本原理 66
2 纸电泳 67
3 薄层电泳 69
4 薄膜电泳 70
5 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析(SDS-PAGE) 71
6 固相pH梯度IEF-SDS蛋白质组双向凝胶电泳分析 75
7 蛋白质印迹法(Western blotting) 84
第五章 蛋白质定量和定性分析 88
1 蛋白质含量测定 88
2 Folin-酚试剂法(Lowry法) 90
3 考马斯亮蓝法(Bradford法) 92
4 紫外吸收法 95
5 蛋白质分子量的测定 97
6 蛋白质纯度分析 98
7 糖蛋白中糖含量分析 99
8 蛋白质N末端序列分析 102
9 蛋白质C末端序列分析 105
第六章 纯化蛋白的浓缩、干燥和保存 107
1 浓缩 107
2 干燥 110
3 纯化蛋白制成品的保存 112
4 蛋白质和酶保存方法 113
第七章 不同组织蛋白质分离纯化 115
1 动物组织 115
2 植物组织 117
3 细菌细胞 121
4 真菌细胞 124
第八章 重组蛋白的分离与纯化 128
1 大肠杆菌(E.coli)表达蛋白产物 128
2 酵母表达系统的蛋白与纯化 132
3 哺乳动物培养细胞重组蛋白的表达与分离纯化 135
4 GST融合蛋白的表达及分离纯化 139
5 His-Tag融合蛋白的分离纯化 142
第九章 膜蛋白的分离 146
1 膜蛋白的特性 146
2 膜蛋白抽提 146
3 分离膜蛋白的基本原则 147
4 分离细胞膜蛋白的方法 148
5 分离组织膜蛋白的方法 149
6 分离细菌膜蛋白的方法 149
第十章 特殊蛋白质纯化实例 151
1 乳清蛋白各成分分离 151
2 蔗糖酶的纯化 152
3 辣根过氧化物酶的纯化 152
4 烟草含铜锌超氧化物歧化酶的纯化 153
5 乙醇脱氢酶的纯化 155
6 胞外脂酶的纯化 156
7 核糖核酸酶的纯化 157
8 β-葡萄糖苷酶的纯化 158
9 α-半乳糖苷酶的纯化 158
10 甲硫氨酸特异性氨肽酶的纯化 159
附件 161
参考文献 176