1 核酸的制备 2
1.1 DNA的制备 3
实验1-1-1 植物基因组DNA的提取 4
实验1-1-2 DNA溶液的纯化和浓缩 6
1.2 RNA的制备 8
实验1-2-1 基因组总RNA的提取 9
实验1-2-2 mRNA的分离和纯化 12
1.3 质粒DNA的制备 14
实验1-3-1 质粒DNA的提取 14
1.4 λ噬菌体DNA的制备 20
实验1-4-1 λ噬菌体的培养 20
实验1-4-2 λ噬菌体DNA的提取 22
2 DNA重组体的构建 24
2.1 目的基因的获取 24
实验2-1-1 cDNA文库的构建 25
实验2-1-2 PCR扩增分离目的DNA片段 29
实验2-1-3 RT-PCR扩增获取目的基因 32
实验2-1-4 功能基因 cDNA 3′末端及5′末端的克隆 34
2.2 载体DNA与目的DNA片断的限制性内切酶酶切 39
实验2-2-1 限制性内切酶的酶切与鉴定 40
2.3 载体与目的基因的连接 43
实验2-3-1 载体与目的基因的连接 46
实验2-3-2 PCR产物与T载体连接 49
2.4 重组子的转化 52
实验2-4-1 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 52
实验2-4-2 醋酸锂法转化酵母细胞 54
实验2-4-3 噬菌体转导 55
2.5 重组质粒的鉴定 58
实验2-5-1 α互补法筛选重组子 58
3 克隆基因的体外表达与分析 61
实验3-1 外源基因在原核细胞中的表达 62
实验3-2 外源基因在酿酒酵母表达系统中的表达 66
实验3-3 体外转录和翻译偶联检测法 68
实验3-4 表达蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 73
实验3-5 Western免疫印迹 76
4 林木基因工程实验技术 79
4.1 组织培养再生体系的建立 79
实验4-1-1 愈伤组织的诱导 81
实验4-1-2 不定芽的分化 83
实验4-1-3 壮苗和生根培养 85
4.2 欧美山杨遗传转化体系的建立 86
实验4-2-1 抗生素的敏感性实验 86
实验4-2-2 农杆菌介导的欧美山杨杂种的遗传转化 89
实验4-2-3 超声波介导的转化 91
4.3 转基因植株的检测 92
实验4-3-1 Gus活性检测 92
实验4-3-2 转基因植株目的基因的PCR检测 94
实验4-3-3 Southern印迹杂交检测外源基因的整合 96
实验4-3-4 半定量RT-PCR检测 99
实验4-3-5 Northern杂交技术 101
附录1 核酸及蛋白质常用数据 105
附录2 常用酶的配制 107
附录3 常用抗生素溶液的配制方法 108
附录4 常用贮存液的配制 109
附录5 常用缓冲液的配制 112
附录6 常用细菌培养基的配制 116
附录7 常用的农杆菌培养基成分 118
附录8 常用树木组织培养基的配制 119
主要参考文献 120