第一部分 细胞工程及基因工程疫苗 1
实验一 原核表达载体的构建及蛋白质的表达 1
(一)实验流程参考图 1
(二)质粒DNA的提取和酶切电泳鉴定 2
(三)目的基因的获得和重组载体的构建 5
(四)感受肽细胞的制备和转化及筛选鉴定 8
(五)目的基因在原核细胞中的表达与SDS-PAGE、West-blot鉴定 11
实验二 丽春番茄遗传转化体系的建立 16
(一)GFP基因的植物表达载体的构建 17
(二)冻融法将pBI121 GFP导入农杆菌 20
(三)农杆菌的转化 22
(四)检测 23
实验三 融合基因在毕赤酵母中的表达 27
(一)融合基因的构建 29
(二)重组酵母表达载体的构建 32
(三)重组菌株的构建 33
(四)酵母工程菌株的甲醇诱导分泌表达 34
第二部分 生化药物 36
实验四 天然产物的提取分离及检测 36
(一)虎杖中蒽醌类化合物的提取、分离和检识 36
(二)槐米中芦丁的提取、分离和检识 39
(三)黄芩苷的提取、分离和检识 42
(四)氧化苦参碱的提取、分离和鉴定 43
(五)大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定 46
(六)生物有机质的提取、分离(设计实验) 48
(七)真菌多糖的提取、化学结构及其药理活性研究 49
(八)真菌多糖的体内抗肿瘤活性检测 57
第三部分 酶工程 58
实验五 酶工程技术 58
(一)羧肽酶的制备及其性质 58
(二)蛋清中溶菌酶的提取及活力测定 62
(三)大蒜细胞SOD的提取和分离 64
(四)Western-Blotting技术 65
第四部分 免疫技术 69
实验六 单克隆抗体的制备 69
(一)材料与方法 69
(二)结果 74
(三)讨论 75
实验七 多克隆抗体的制备、纯化及免疫电泳 77
(一)多克隆抗体的制备 77
(二)亲和层析法纯化抗体 79
(三)免疫电泳 80
第五部分 发酵工程及能源 83
实验八 玉米原料酒精发酵实验 83
第六部分 生物材料 85
实验九 光与生物实验 85
(一)紫外—可见吸收光谱法定量分析色氨酸 85
(二)生物液体的渗透压——巴尔德热尔和拉斯特法 86
(三)Scatchard图分析血红蛋白和红细胞膜相互作用 90
(四)红细胞溶血速率的测量 92
(五)生物大分子荧光光谱的测量 94
(六)芳香族氨基酸和蛋白质的低温磷光光谱的测量 97
实验十 He-Ne激光辐照对白菜种子萌发及生理影响 100
实验十一 Nd3+:YAG倍频激光对大豆幼苗异黄酮的影响 106
实验十二 Ⅰ型胶原的提取和提纯,Ⅱ型胶原的提取 114
实验十三 Ⅱ型胶原粗提液的提纯 115
实验十四 胶原凝胶 116
(一)胶原凝胶的制备 116
(二)胶原凝胶中原位培养细胞制备支架 117
(三)提纯壳聚糖及壳聚糖凝胶的制备 118
(四)纳米羟基磷灰石的制备 119
附录一 常用洗涤剂的配制及用途 121
附录二 常用蛋白质分子量标准参照物 122
附录三 常用化学试剂等级表示法及用途 123
附录四 常用单位名称及其缩写 124
附录五 常用缓冲溶液常用浓度及pH值范围 125
附录六 常用三种凝胶的种类型号及性能 126
附录七 硫酸铵饱和度的常用表 127
参考文献 129