第一章 绪论 1
1.1 鼠伤寒沙门菌及其危害 1
1.1.1 主要生物学特点 3
1.1.2 流行病学 7
1.1.3 诊断与防治 8
1.2 减毒鼠伤寒沙门菌 11
1.2.1 减毒沙门菌的研究背景 11
1.2.2 用于鼠伤寒沙门菌减毒的相关致病因子 12
1.2.3 鼠伤寒沙门菌的减毒 19
1.2.4 减毒鼠伤寒沙门菌的入侵与免疫机制 25
1.3 减毒鼠伤寒沙门菌作为活载体研究 28
1.4 展望 31
第二章 鼠伤寒沙门菌缺失菌株△crpSL1344和△cyaSL1344的构建与鉴定 36
2.1 材料 36
2.1.1 细菌菌株、质粒和培养条件 36
2.1.2 主要试剂和培养基 38
2.1.3 主要培养基及抗生素的配制 38
2.1.4 主要试剂的配制 39
2.1.5 主要实验器材 40
2.2 方法 40
2.2.1 PCR引物的设计与合成 40
2.2.2 细菌的活化 47
2.2.3 细菌基因组DNA的制备 48
2.2.4 质粒的制备 48
2.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备（氯化钙法） 49
2.2.6 细菌或重组质粒的PCR鉴定 50
2.2.7 重组质粒的酶切鉴定 50
2.2.8 PCR产物或酶切产物的回收与纯化 51
2.2.9 目的片段的连接及其产物的转化 52
2.2.10 鼠伤寒沙门菌SL1344株crp及cya基因的克隆与鉴定 52
2.2.11 重组自杀性质粒pRE△cya的构建 53
2.2.12 鼠伤寒沙门菌缺失菌株△crpSL1344、△cyaSL1344的构建 54
2.3 结果与分析 55
2.3.1 SL1344株crp、cya基因的克隆与序列分析 55
2.3.2 重组自杀性质粒pRE△cya的构建 56
2.3.3 缺失菌株△crpSL1344、△cyaSL1344的筛选 59
2.4 讨论 63
2.4.1 重组自杀性质粒的特性及应用 63
2.4.2 靶标基因的选择及其缺失意义 65
2.5 小结 66
第三章 鼠伤寒沙门菌缺失菌株△crpSL1344和△cyaSL1344生物学特性比较研究 67
3.1 材料 67
3.1.1 菌株、试剂和培养基 67
3.1.2 实验动物与药敏纸片 68
3.1.3 主要培养基及试剂配制 68
3.1.4 主要实验器材 69
3.2 方法 70
3.2.1 沙门菌的特异性PCR鉴定 70
3.2.2 缺失菌株△crpSL1344、△cyaSL1344的表型鉴定 70
3.2.3 缺失菌株△crpSL1344、△cyaSL1344遗传稳定性测定 71
3.2.4 缺失菌株△crpSL1344、△cyaSL1344耐药性检测 71
3.2.5 缺失菌株△crpSL1344、△cyaSL1344生长特性鉴定 71
3.2.6 缺失菌株△crpSL1344、△cyaSL1344的毒力测定 71
3.3 结果与分析 72
3.3.1 缺失菌株△crpSL1344、△cyaSL1344的表型鉴定 72
3.3.2 缺失菌株△crpSL1344、△cyaSL1344耐药性检测 75
3.3.3 缺失菌株△crpSL1344、△cyaSL1344遗传稳定性测定 76
3.3.4 缺失菌株△crpSL1344、△cyaSL1344生长特性鉴定 77
3.3.5 缺失菌株△crpSL1344、△cyaSL1344的毒力测定 78
3.4 讨论 80
3.4.1 基因缺失对表型的影响 81
3.4.2 基因缺失对毒力的影响 82
3.5 小结 83
第四章 鼠伤寒沙门菌缺失株△cyaSL1344的免疫保护研究 86
4.1 材料 86
4.1.1 菌株、试剂和培养基 86
4.1.2 实验动物 86
4.1.3 主要培养基及试剂配制 86
4.1.4 主要实验器材 87
4.2 方法 87
4.2.1 雏鸡沙门菌的免疫程序 87
4.2.2 免疫接种对雏鸡生长发育的影响 87
4.2.3 缺失菌株在体内的存活时间检测 87
4.2.4 免疫雏鸡细胞免疫水平检测 88
4.2.5 免疫雏鸡ELISA抗体检测 88
4.2.6 △cyaSL1344缺失菌株对鼠伤寒沙门菌强毒株攻击雏鸡的保护性评价 88
4.2.7 △cyaSL1344缺失疫苗对鸡白痢沙门菌强毒株攻击雏鸡的保护性评价 88
4.3 结果与分析 88
4.3.1 缺失菌株△cyaSL1344免疫接种对雏鸡的生长发育的影响 88
4.3.2 缺失菌株△cyaSL1344缺失菌株在体内的存留时间 89
4.3.3 缺失菌株△cyaSL1344免疫雏鸡后细胞免疫水平检测 89
4.3.4 缺失菌株△cyaSL1344免疫雏鸡后ELISA抗体检测 90
4.3.5 △cyaSL1344缺失菌株对鼠伤寒沙门菌强毒株攻击雏鸡的保护性评价 90
4.3.6 △cyaSL1344缺失疫苗对鸡白痢沙门菌强毒株攻击雏鸡的保护性评价 91
4.4 讨论 91
4.5 小结 95
第五章 展望 100
参考文献 100
附录 114
附录一 英文缩写词表 114
附录二 cya碱基序列 116
附录三 cya氨基酸序列 118
附录四 crp碱基序列 118
附录五 crp氨基酸序列 119
附录六 pBluscriptII SK（＋）载体氨基酸序列 119
后记 122