第一篇 生化物质分离纯化技术的基本原理 3
第一章 培养液的预处理 3
一、凝聚和絮凝 4
二、加沉淀剂 4
三、调节培养液的pH 4
四、吸附作用 5
第二章 细胞破碎 5
一、机械法 6
二、非机械法 7
第三章 基因工程菌包含体的分离纯化 8
一、包含体的洗涤和目标蛋白的变性溶解 9
二、目标蛋白的复性 10
第四章 沉淀法 11
一、盐析法沉淀蛋白质 11
二、等电点沉淀法 14
三、有机溶剂沉淀法 15
四、其他沉淀方法 15
五、亲和沉淀法 15
第五章 膜分离技术 17
一、膜分离技术的分类 17
二、膜的性能参数 18
三、膜的结构和材料 19
四、膜组件型式和操作方式 20
五、浓差极化 21
六、影响膜分离的因素 22
七、膜的污染和清洗 23
八、膜亲和过滤法 23
第六章 有机溶剂萃取法 24
一、基本原理和操作 24
二、分配系数和弱电解质的分配平衡 24
三、影响萃取操作的因素 25
第七章 两水相萃取 27
一、基本概念 27
二、成相系统 28
三、分配平衡 28
四、影响分配系数Ki的因素 29
五、亲和分配 30
六、再生型两水相萃取 31
第八章 反胶束萃取 31
一、基本概念和反胶束相系统 32
二、反胶束萃取过程 34
三、影响反胶束萃取的因素 35
四、亲和反胶束萃取 36
第九章 超临界流体萃取 37
一、超临界流体的特性 37
二、超临界流体的溶解性能 39
三、超临界流体萃取的基本操作和设备 39
四、夹带剂对超临界CO2流体萃取的强化作用 40
五、超临界萃取的特点和应用 41
第十章 微波萃取技术 41
一、基本原理 42
二、微波萃取的特点 42
三、影响微波萃取的因素 43
四、微波萃取设备 44
五、微波萃取技术的应用 45
第十一章 离子交换法 45
一、离子交换剂 46
二、离子交换树脂的分类 46
三、离子交换树脂几个主要的物理参数 48
四、离子交换树脂的交换能力和选择性 49
五、离子交换树脂和操作条件的选择 50
六、离子交换设备与过程的放大 51
第十二章 大网格（大孔）树脂吸附法 54
一、大网格树脂吸附剂的结构和类型 54
二、吸附等温线 56
三、大网格树脂吸附法提取生化物质工艺条件的选择 56
第十三章 色层分离法 57
一、基本概念 57
二、凝胶层析 60
三、离子交换层析 62
四、亲和层析 64
第十四章 电泳技术 66
一、基本原理 66
二、凝胶电泳 67
三、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 68
四、等电聚焦电泳 69
参考文献 72
第二篇 生物分离工程基础实验 77
实验一 絮凝技术预处理发酵液及滤饼的质量比阻测定 77
实验二 碱性蛋白酶的盐析沉淀 78
实验三 Folin法测定碱性蛋白酶活性 81
实验四 有机溶剂萃取法中pH对表观分配系数的影响 83
实验五 反胶束萃取法pH对萃取率的影响 85
实验六 PEG/（NH4）2SO4两水相系统的相图 87
实验七 两水相系统中蛋白质分配系数的测定 89
实验八 考马斯亮蓝比色法测定蛋白质含量 90
实验九 离子交换树脂总交换容量的测定 92
实验十 大网格吸附树脂的吸附等温线的制作 95
实验十一 薄层层析法分离鉴定熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸 98
实验十二 凝胶层析法测定蛋白质相对分子质量 101
实验十三 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测定蛋白质的等电点 104
第三篇 生物分离工程大型综合实验 111
实验一 亲和沉淀法纯化牛血清白蛋白 111
Ⅰ亲和配基的连接 111
Ⅱ亲和沉淀法纯化牛血清白蛋白的工艺研究 114
实验二 用超滤技术浓缩和分离碱性蛋白酶 116
实验三 用两种分离技术提取红霉素的工艺比较 120
Ⅰ有机溶剂萃取法制备硫氰酸红霉素的工艺研究 120
Ⅱ大网格树脂吸附法提取红霉素的工艺研究 122
Ⅲ比色法测定红霉素效价 125
实验四 可再生型两水相体系萃取红霉素的研究 127
Ⅰ无机盐对再生型两水相体系萃取红霉素分配系数的影响 127
Ⅱ可再生两水相体系萃取红霉素及高聚物的回收 131
实验五 用反胶束萃取技术提取胰蛋白酶 133
Ⅰ反胶束萃取法提取胰蛋白酶的工艺研究 133
Ⅱ胰蛋白酶酶活和比活的测定方法 135
实验六 超临界法萃取青蒿素和高效液相色谱法检测 138
Ⅰ超临界CO2流体萃取青蒿素 138
Ⅱ用高效液相色谱（HPLC）鉴定青蒿素纯度 141
实验七 用微波萃取和大网格树脂吸附法提取茶多酚 144
Ⅰ微波萃取和常规萃取提取茶多酚的工艺比较 144
Ⅱ大网格树脂吸附法精制茶多酚 147
Ⅲ酒石酸亚铁分光光度法测定茶多酚含量 149
实验八 用两种分离技术提取柠檬酸的工艺比较 151
Ⅰ钙盐沉淀法提取柠檬酸 152
Ⅱ离子交换法提取柠檬酸 155
实验九 离子交换法提取抗生素的工艺研究 158
实验十 从甜菊叶中提取甜菊糖苷的小试及放大工艺 161
Ⅰ从甜菊叶中提取甜菊糖苷的小试工艺 162
Ⅱ从甜菊叶中提取甜菊糖苷的中试生产工艺 167
实验十一 离子交换法制备纯水 170
实验十二 凝胶层析法纯化胰激肽原酶 174
Ⅰ Sephadex G-75凝胶层析法纯化胰激肽原酶 174
Ⅱ紫外分光光度法测定胰激肽原酶活性 178
实验十三 重组人酸性成纤维细胞生长因子的分离和纯化 180
Ⅰ菌体的细胞破碎和前处理 180
Ⅱ亲和层析法纯化目标蛋白 183
Ⅲ SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定相对分子质量及纯度 185
实验十四 基因工程血管生长抑素包含体的变性和复性工艺研究 189
Ⅰ菌体的细胞破碎和洗涤 190
Ⅱ目标蛋白的变性溶解和凝胶层析纯化的工艺研究 192
Ⅲ目标蛋白的复性工艺研究 194
Ⅳ四唑盐（MTT）比色法检测细胞活性 197
实验十五 包含体TRAIL蛋白的复性和纯化 200
Ⅰ包含体TRAIL蛋白复性的前处理 201
Ⅱ包含体复性方法的研究 203
Ⅲ用亲和层析和离子交换层析法分离纯化目标蛋白复性液 206
实验十六 金属螯合亲和层析纯化重组内酰胺酶 210
Ⅰ β-内酰胺酶的诱导表达和菌体的收集破碎 210
Ⅱ金属螯合亲和层析法纯化β-内酰胺酶 212
Ⅲ聚丙烯酰胺凝胶电泳测定纯度 214
Ⅳ酶催化反应测定酶活 215
附录 217
一、实验室常用酸碱的密度和浓度 217
二、一些常见蛋白质相对分子质量参考值 217
三、一些常见蛋白质的等电点参考值 218
四、部分常见氨基酸的等电点参考值 219
五、硫酸铵饱和度计算表 220
六、酸度计标准缓冲溶液的配制方法 221
七、常用缓冲溶液的配制方法 222