第一章 玉米种子质量鉴定技术的发展 1
第一节 玉米种子质量及种子质量检测的重要性 1
第二节 主要的种子鉴定技术 3
一、常规鉴定技术 3
二、现代鉴定技术 4
第三节 分子技术在玉米品种鉴定中的发展趋势 11
一、从RAPD标记到SSR标记的技术提升 11
二、从SSR标记到SNP标记的技术探索 11
三、从非功能标记向功能标记的转变 12
第二章 玉米品种DNA指纹鉴定标准试验体系的建立 17
第一节 DNA提取方法的研究 17
一、DNA提取的基本方法及原理 17
二、DNA快速提取方法研究——碱煮法 24
三、高质量DNA提取方法研究——改良高盐低pH法 26
四、果皮组织DNA提取方法研究 28
第二节 PCR扩增反应程序和反应体系的研究 30
一、通用PCR扩增反应程序的建立 30
二、多重PCR扩增体系的建立 33
第三节 电泳检测方法的研究 37
一、主要电泳检测方法的比较 37
二、PAGE／快速银染检测法的研究 38
三、毛细管电泳多色荧光检测与变性PAGE电泳银染检测两种检测方法的比较 41
四、毛细管电泳荧光检测中的异常电泳类型及原因分析 44
第三章 核心引物的筛选确定及多重电泳系统的建立 49
第一节 玉米DNA指纹鉴定中核心引物组合法的确立 49
一、特征谱带法、引物组合法和核心引物组合法的概念 49
二、特征谱带法、引物组合法和核心引物组合法的比较研究 49
第二节 玉米通用SSR核心引物筛选 51
一、研究目的 51
二、研究思路 51
三、100个核心引物筛选的详细步骤 53
四、核心引物的重新设计 58
五、荧光多重PCR组合的建立 62
第三节建库核心引物的确定及多重电泳系统的建立 64
第四章 玉米DNA指纹库数据统计及建库标准化规范 72
第一节 DNA指纹库数据的统计 72
一、建库SSR引物基本信息 72
二、原始数据统计记录方式 73
三、原始数据导入数据库的方式 73
第二节玉米DNA指纹数据库建库标准化规范的建立 74
一、标记方法及标记来源 74
二、检测平台 74
三、试剂质量保证 75
四、样品的来源及性质 75
五、引物及流程的评估 75
六、不同来源数据的有效整合 76
七、构建品种DNA指纹模式库 77
八、构建品种DNA指纹扩展库 78
九、数据库数据的随机盲测 78
第五章玉米DNA指纹数据库管理系统的建立 79
第一节数据信息表的整理 79
一、信息类资料 79
二、数据类资料 81
三、图片类资料 82
第二节分析功能的设计及实现 82
一、主要功能及定义 82
二、品种查询比较功能的设计 83
三、亲子鉴定功能的设计 84
四、品种指纹图谱绘制功能的设计 85
五、一致性鉴定功能的设计 86
六、纯度鉴定功能的设计 87
第三节网站用户权限分类及设计 87
第四节未来发展战略规划 88
一、建立玉米DNA指纹国际联合数据库及管理系统 88
二、建立DNA指纹数据库、分子标记辅助育种、单倍体育种技术三位一体的高效玉米育种技术体系 89
第六章 DNA指纹技术在玉米品种真实性、纯度、一致性、特异性鉴定中的应用研究 90
第一节 DNA指纹技术在玉米品种真实性鉴定中应用的方式和策略 90
一、涉及品种真实性鉴定的几个重要概念 90
二、真实性鉴定的类别 91
第二节 DNA指纹技术在玉米品种纯度鉴定中的应用研究 94
一、玉米杂交种纯度鉴定核心引物的选择标准 94
二、特定品种纯度鉴定特异引物选择标准 96
三、双亲互补带型——适于玉米杂交种纯度鉴定的谱带类型 98
四、玉米杂交种纯度鉴定具体工作流程 99
五、4种混杂类型谱带分析举例 100
第三节 DNA指纹技术在玉米品种一致性鉴定中的应用研究 104
一、一致性检测中异型带的类型 104
二、不同品种、不同位点一致性分布特征 105
三、一致性检测标准的制定 108
四、造成品种一致性差的原因分析 110
第四节 DNA指纹技术在玉米品种特异性鉴定中的应用研究 110
一、现行的形态DUS测试系统面临的问题 110
二、分子技术在玉米特异性测试中的应用策略 111
三、分子测试标准的制定 113
四、需探讨的几个问题 114
第七章 DNA指纹技术在玉米品种鉴定中的应用 115
第一节我国玉米品种推广情况及对品种管理工作的启示 115
一、不同省份玉米种植面积概况 115
二、不同省份玉米品种推广概况 116
三、不同玉米品种推广趋势 119
四、玉米品种推广情况反映出来的重要信息 121
第二节 DNA指纹技术在玉米品种区域试验中的应用 122
一、我国玉米区域试验品种DNA指纹检测工作历程 123
二、玉米区域试验品种DNA指纹检测工作特点 123
三、DNA指纹监控工作值得思考的几个问题 127
四、玉米区试DNA指纹检测工作的意义 129
五、关于加强品种市场管理的对策建议 129
第三节 DNA指纹技术在玉米自交系鉴定中的应用研究 131
一、DH系群体材料的创制 131
二、DH系群体材料的鉴定评价 132
三、DH系的表现 132
四、DNA指纹技术在鉴定DH系材料纯合程度上的价值 134
第八章 玉米品种实验室鉴定技术具体操作程序 136
第一节 玉米SSR标记鉴定技术 136
一、DNA提取 136
二、PCR扩增 144
三、电泳检测 146
四、数据统计记录 155
五、结果判定 156
第二节 玉米种子清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定技术 156
一、实验目的 156
二、仪器设备与试剂 156
三、溶液配制 156
四、电泳操作技术 157
第三节 玉米种子酯酶同工酶等电聚焦电泳 158
一、实验目的 158
二、仪器设备与试剂 158
三、溶液配制 158
四、电泳操作技术 159
附录 法规文件汇编汇总 166
玉米品种真实性DNA鉴定技术规范 166
国家玉米品种试验DNA指纹鉴定管理办法 182
国家区试玉米品种一致性及真实性DNA指纹检测技术 184
农作物种子质量监督抽查管理办法 191
最高人民法院关于审理侵犯植物新品种权纠纷案件具体应用法律问题的若干规定 196
农业植物新品种权侵权案件处理规定 198
北京市高级人民法院关于印发《北京市高级人民法院关于知识产权司法鉴定若干问题的规定（试行）》的通知 201
农作物种子质量纠纷田间现场鉴定办法 205
北京市种子管理站行政处罚条例 208
DNA指纹图谱测试指南：分子标记选择和数据库构建（概要） 214
中华人民共和国种子法 217
农业转基因生物安全管理条例 226
中华人民共和国植物新品种保护条例实施细则（农业部分） 233
主要农作物品种审定办法 242
农业部现行规章清理结果 246
农业植物品种命名规定 247
主要参考文献 249