第1篇生物工程常用实验技术及原理 1
第1章 生物化学实验基本理论 1
1.1 电泳技术 1
1.2 PCR技术 2
1.3 糖、核酸、蛋白质等生物分子浓度的测定 3
第2章 微生物学实验基本理论 4
2.1 微生物学实验的意义 4
2.2 微生物的显微观察及染色原理 4
2.3 微生物的培养及分离纯化 7
2.4 微生物的生理生化鉴定 8
2.5 微生物的生长繁殖 9
第3章 重组DNA技术 10
3.1 目的基因的获取 10
3.2 基因与载体的连接（以质粒载体为例） 11
3.3 重组基因导入受体细胞构建工程菌 11
3.4 筛选含有目的基因的受体细胞 12
第4章 发酵工程实验原理 14
4.1 发酵的基本内容 14
4.2 发酵过程的组成 14
4.3 发酵罐的类型 15
4.4 发酵罐及培养基的灭菌 15
4.5 发酵培养基的配制 17
4.6 发酵过程的控制 17
第5章 常用生物分离实验技术及原理 18
5.1 细胞破碎 18
5.2 过滤和离心 18
5.3 沉淀 18
5.4 萃取 19
5.5 膜分离 20
5.6 色谱 20
第6章 生物反应工程实验原理 22
6.1 均相酶催化反应动力学 22
6.2 生物反应器中氧的传递特性 25
第7章 细胞固定化及生物催化原理 30
7.1 细胞固定化概述 30
7.2 细胞固定化方法 30
7.3 生物催化概述 31
第2篇实验部分 32
第8章 生物化学实验 32
实验8.1 部分药品试剂的配制及高压灭菌 32
实验8.2 还原糖的测定——3,5-二硝基水杨酸（DNS）比色法 34
实验8.3 基因组DNA的分离提取及电泳检测 36
实验8.4 DNA浓度及纯度的测定 38
实验8.5 蛋白质的SDS-PAGE检测 39
实验8.6 牛乳球蛋白基因的PCR扩增及电泳检测 40
第9章 微生物学实验 41
实验9.1 显微镜的使用及微生物形态的观察 41
实验9.2 细菌的革兰染色法 44
实验9.3 牛肉膏蛋白胨培养基的制备 47
实验9.4 微生物分离、纯化及培养特征观察 52
实验9.5 空气中微生物的检测 58
实验9.6 淀粉水解实验 61
实验9.7 大肠杆菌生长曲线的测定 63
第10章 基因工程实验 65
实验10.1 E.coli基因组DNA的提取及电泳检测 65
实验10.2 glyA基因PCR扩增、检测和纯化 67
实验10.3 质粒pET28a的提取及检测 69
实验10.4 质粒pET28a-glyA的构建 71
实验10.5 感受态细胞的制备和转化 73
第11章 发酵工程实验 76
实验11.1 实验室常用发酵罐的基本结构与功能 76
实验11.2 发酵罐及培养基的灭菌与接种培养技术 78
实验11.3 利用大肠杆菌E.coli BL21（DE3）（pET28a-glyA）工程菌表达丝氨酸羟甲基转移酶 81
实验11.4 固态发酵法生产柠檬酸 85
第12章 生物分离工程实验 89
实验12.1 植物细胞的破碎及超氧化物歧化酶的浸提 89
实验12.2 考马斯亮蓝G250法测定蛋白质含量 91
实验12.3 联大茴香胺盐酸盐法测定超氧化物歧化酶活力 93
实验12.4 双水相系统萃取超氧化物歧化酶 95
实验12.5 热激和盐析法提取超氧化物歧化酶 97
实验12.6 纤维素离子交换柱色谱纯化超氧化物歧化酶 99
第13章 生化反应工程实验 101
实验13.1 Lineweaver-Burk法测定胰蛋白酶米氏常数 101
实验13.2 动态法测定溶氧的体积传质系数 104
第14章 酶工程实验 107
实验14.1 α-淀粉酶的提取与活力测定 107
实验14.2 酵母细胞固定化及催化前手性苯乙酮不对称还原合成手性醇 110
附录 112
附录1 生物工程实验室安全和规则 112
附录2 常用缓冲液的配制 118
附录3 常用抗生素和酶的配制 121
附录4 常用培养基的配制 121
附录5 实验室常用贮存液的配制 122
附录6 实验室常用技术参数 126
参考文献 128