上篇 生物化学实验技术原理 1
第一章 生物化学实验样品制备技术 1
第一节 植物样品的制备 1
一、植株组织样品的采集、制备和保存 1
二、籽粒样品的采集、制备和保存 2
三、瓜果样品的采集、制备和保存 3
四、丙酮干粉的制备 3
第二节 动物样品的制备 3
一、血液样品 3
二、组织样品 5
三、尿液样品 5
第三节 微生物样品的制备 6
一、微生物细胞的收集方法 6
二、干细胞制剂的制备 6
三、破碎细胞的方法 6
第二章 电泳技术 8
第一节 基本原理 8
一、影响电泳的因素 8
二、电泳的分类 9
第二节 几种常用电泳技术介绍 10
一、醋酸纤维素薄膜电泳 10
二、琼脂糖凝胶电泳 11
三、聚丙烯酰胺凝胶电泳 12
四、聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳 16
五、等电聚焦电泳 17
六、双向电泳 18
七、变性梯度凝胶电泳 18
第三章 离心技术 20
第一节 基本原理 20
一、离心力 20
二、沉降系数 20
第二节 离心机的种类和基本结构 21
一、种类 21
二、基本结构 21
三、分析型超速离心机 22
第三节 制备超离心法 22
一、差速离心法 22
二、密度梯度离心法 23
第四章 层析技术 26
第一节 层析技术的原理和分类 26
一、层析技术的原理 26
二、层析技术的分类 26
第二节 几种常用的层析法 27
一、分配层析 27
二、薄层层析 28
三、凝胶层析 28
四、亲和层析 30
五、离子交换层析 31
六、吸附层析 32
七、高效液相色谱 32
八、气相色谱 33
第五章 光谱分析技术 35
第一节 基本原理 35
第二节 可见及紫外吸收光谱分析 36
一、可见及紫外分光光度计 37
二、常用的可见及紫外吸收光谱分析方法 38
三、影响可见及紫外吸收光谱分析的因素 39
第三节 荧光发射光谱分析 40
一、荧光分光光度计 40
二、常用的荧光分析方法 41
三、影响荧光分析的因素 41
四、荧光分析的应用 43
第六章 核技术在生物科学中的应用 44
第一节 放射性核素的特点 44
一、同位素及其稳定性 44
二、原子核衰变及放射性 44
三、放射性衰变规律 45
四、核素的测量 47
第二节 同位素示踪技术在生化分析中的应用 48
一、同位素示踪技术在代谢分析中的应用 48
二、同位素示踪技术在分子杂交中的应用 48
第三节 辐射安全防护及放射性实验室规则 50
一、核辐射的个人剂量限制 50
二、放射性污染 51
三、放射性废物的处理 51
四、放射性实验室规则 52
第七章 免疫化学技术 53
第一节 免疫化学技术理论基础 53
一、抗原的相关概念 53
二、抗体的结构和功能 54
三、抗原抗体的结合 56
四、动物的常规免疫 57
第二节 常见免疫化学技术 59
一、酶联免疫吸附试验 60
二、免疫印迹 61
三、原位杂交组织化学 62
主要参考文献 63
下篇 生物化学实验方法 64
第八章 糖类化学 64
实验1 可溶性糖的定量测定 64
方法一 蒽酮法 64
方法二 苯酚-硫酸法 66
实验2 还原糖和总糖的测定——3，5-二硝基水杨酸比色法 68
实验3 血糖的定量测定 70
方法一 葡萄糖氧化酶法 70
方法二 邻甲苯胺法 71
实验4 直链淀粉和支链淀粉含量的测定——碘比色法 73
实验5 可溶性糖的硅胶G薄层层析 75
第九章 脂类化学 78
实验6 粗脂肪的提取和定量测定——索氏抽提法 78
实验7 血清三酰甘油的含量测定 80
实验8 血清总胆固醇含量的测定 82
方法一 磷硫铁法 82
方法二 邻苯二甲醛法 84
实验9 酮体的生成与利用 85
第十章 蛋白质化学 88
实验10 纸层析法分离鉴定氨基酸 88
实验11 谷物种子中赖氨酸含量的测定 90
实验12 种子蛋白的氨基酸组分分析——氨基酸自动分析仪法 91
实验13 谷物种子蛋白质组分的分离提取 93
实验14 蛋白质的两性性质和酪蛋白等电点的测定 94
实验15 血红蛋白的两性解离 96
实验16 蛋白质含量测定 97
方法一 凯氏定氮法 97
方法二 双缩脲法 100
方法三 Folin-酚法 102
方法四 考马斯亮蓝G-250法 104
方法五 紫外吸收法 105
方法六 BCA法 107
实验17 蛋白质相对分子质量测定 108
方法一 凝胶过滤法 108
方法二 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 112
实验18 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 116
实验19 小麦高分子质量麦谷蛋白亚基聚丙烯酰胺凝胶电泳 118
实验20 蛋白质印迹——Western blotting 120
第十一章 核酸化学 124
实验21 核酸含量的测定 124
方法一 定磷法测定核酸含量 124
方法二 紫外吸收法测定核酸含量 126
实验22 核酸的电泳分离鉴定 128
方法一 DNA的琼脂糖凝胶电泳 128
方法二 RNA的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳 130
方法三 尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 132
实验23 酵母RNA的分离及组分鉴定 133
实验24 质粒DNA的提取与检测 135
实验25 总DNA的提取 138
方法一 植物总DNA的提取——CTAB法 138
方法二 动物肝脏中总DNA的提取 139
实验26 RNA的提取 141
方法一 总RNA的小量提取——TRIzol法 141
方法二 总RNA的大量提取——异硫氰酸胍法 142
实验27 聚合酶链式反应（PCR） 144
实验28 核酸的分子杂交 145
方法一 Southern印迹杂交 145
方法二 Northern印迹杂交 148
第十二章 酶化学 152
实验29 枯草杆菌蛋白酶活力测定 152
实验30 淀粉酶活性的测定 154
实验31 硝酸还原酶活性的测定 156
实验32 NBT法测定超氧化物歧化酶（SOD）活力 159
实验33 胰凝乳蛋白酶的制备及活力测定 161
实验34 精氨酸激酶的分离纯化及活力测定 165
实验35 影响唾液淀粉酶活力的因素 168
实验36 底物浓度对酶促反应速度的影响——过氧化氢酶Km值的测定 171
实验37 酶浓度对酶促反应速度的影响——碱性磷酸酶活性测定 174
实验38 过氧化物同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳 176
第十三章 维生素 178
实验39 维生素A的定量测定 178
实验40 还原型维生素C含量的测定——2，6-二氯酚靛酚法 180
实验41 维生素C含量的测定——紫外比色法 182
实验42 维生素B1的定性测定 183
实验43 维生素B2的荧光测定 185
第十四章 新陈代谢 188
实验44 糖酵解中间产物的鉴定 188
实验45 转氨基反应的定性鉴定 190
实验46 谷丙转氨酶活性的测定 192
实验47 脂肪酸的β氧化 194
第十五章 免疫化学 196
实验48 免疫血清的制备 196
实验49 琼脂扩散法测定抗体效价 197
实验50 酶联免疫吸附法 199
主要参考文献 201
附录 202
一、生物化学实验室规则 202
二、实验室安全及防护知识 202
三、常用仪器的使用方法 205
四、常用缓冲溶液的配制 212
五、常用酸碱指示剂 217
六、常用酸碱试剂的浓度及相对密度 218
七、标准溶液的配制和标定 218
八、25℃时调整硫酸铵溶液铵饱和度计算表 219
九、常见元素的相对原子质量 220
十、数据处理 221