第一篇 常用实验技术 1
第一章 分光光度技术 1
一、光的基本知识 1
二、朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律 2
三、分光光度计结构简介 3
四、分光光度技术的应用 4
五、分光光度法的误差 5
六、使用分光光度计的注意事项 6
第二章 色谱技术 7
第一节 概述 7
一、色谱法的概念和特点 7
二、色谱法的分类 8
一、吸附色谱 9
第二节 常用的色谱方法 9
二、分配色谱 12
三、凝胶色谱 14
四、离子交换色谱 19
五、亲和色谱 21
六、高效液相色谱 23
第三章 电泳技术 27
第一节 基本原理 27
一、电荷的来源 27
二、迁移率 28
三、影响电泳速度的因素 29
第二节 醋酸纤维薄膜电泳 30
第三节 琼脂糖凝胶电泳 31
一、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系 31
三、琼脂糖凝胶电泳基本方法简介 32
二、核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系 32
一、聚丙烯酰胺凝胶聚合原理及相关特性 33
第四节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 33
二、聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 34
三、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 37
四、聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳原理 38
五、聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳原理 39
六、聚丙烯酰胺凝胶双向电泳原理 40
第五节 毛细管电泳 41
一、基本原理 41
二、毛细管电泳仪 41
四、进样 42
五、电泳和检测 42
三、电渗 42
六、毛细管电泳分离模式 43
七、毛细管电泳的特点 43
第六节 染色方法 44
一、蛋白质染色 44
二、脂蛋白染色 45
三、核酸的染色 45
第四章 离心技术 47
第一节 离心理论 47
一、离心分离的原理 47
二、沉降系数 49
三、相对离心力和离心时间 49
四、离心机的分类 50
一、差速离心法 51
第二节 离心分离的种类 51
二、密度梯度离心法 52
第三节 离心操作要领 53
第五章 透析和超滤 55
一、透析 55
二、超滤 56
第六章 实验方法及质量控制 57
一、准确度 57
二、特异性 58
三、精密度 58
四、灵敏度 59
五、质量控制图 60
一、PCR原理和特点 62
第七章 PCR技术 62
二、PCR系统的组成及PCR最适条件 63
第八章 基因工程技术 65
第一节 概述 65
一、基因和基因工程的概念 65
二、基因工程的兴起和发展 65
三、基因工程的基本技术程序 66
第二节 目的基因的制备 66
一、限制性内切酶酶切获取 66
二、化学法合成 67
三、反转录合成cDNA 67
四、组建“基因组文库”，钓取目的基因 67
五、采用PCR方法制备目的基因 67
二、表达载体 68
一、克隆载体 68
第三节 基因载体的选择 68
三、常用的克隆载体 70
第四节 基因工程常用的工具酶 71
一、限制性核酸内切酶 71
二、DNA聚合酶 74
三、T4 DNA连接酶 74
四、末端脱氧核苷酸转移酶 74
八、碱性磷酸酶 75
第五节 重组体的构建 75
一、连接方式 75
七、脱氧核糖核酸酶Ⅰ 75
六、Sl核酸酶 75
五、逆转录酶 75
二、重组效率的影响因素 76
第六节 重组体导入受体细胞 76
一、重组体导入原核细胞 76
二、重组体导入真核细胞 77
第七节 基因导入受体细胞后的筛选和鉴定 79
一、筛选 79
二、鉴定 80
第二篇 实验项目 81
第九章 基本实验 81
实验一 蛋白质的定量测定 81
一、Folin－酚试剂法 82
二、考马斯亮蓝G-250染色法 84
三、紫外分光光度法 85
四、双缩脲法 87
实验二 氨基酸的离子交换柱色谱分离 88
实验三 血红蛋白与核黄素的凝胶柱色谱分离 90
实验四 醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白 92
实验五 蛋白质的透析纯化 94
实验六 血清过氧化氢酶Km值的测定 95
实验七 血糖测定 98
一、改良的邻甲苯胺硼酸法 98
二、葡萄糖氧化酶法 99
三、吴宪－Folin法 101
实验八 胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响 102
实验九 血清甘油三酯（TG）的测定 103
一、酶法测定甘油三酯 103
二、乙酰丙酮法测定甘油三酯 105
实验十 血浆高密度脂蛋白－胆固醇和总胆固醇的测定 107
实验十一 酮体的生成和利用 109
一、酮体的生成和利用定性测定 109
二、酮体的生成与利用定量测定 110
实验十二 血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性的测定 112
实验十三 免疫血清的制备 115
实验十四 吞噬细胞的功能测定 117
一、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬） 117
二、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬） 118
实验十五 细胞免疫功能测定 118
一、外周血单个核细胞的分离 118
二、E玫瑰花环试验 120
三、淋巴细胞转化试验 121
四、NK细胞活性的检测 124
实验十六 凝集反应 127
一、直接凝集反应 127
二、间接凝集反应 130
实验十七 沉淀反应 132
一、琼脂扩散试验 132
二、对流免疫电泳 135
三、免疫电泳 136
四、火箭免疫电泳 138
实验十八 免疫荧光技术 139
实验十九 免疫酶技术 141
一、夹心法检测HBsAg 141
二、夹心法检测HBeAg 144
三、夹心法检测抗－HBsAg 145
四、竞争法检测抗－HBc 146
五、竞争法检测抗－HBe 147
实验二十 放射免疫测定技术 149
实验二十一 细胞因子的检测 150
一、IL-1的检测（生物活性测定） 151
二、夹心法检测TNF 152
第十章 提高型实验 155
实验二十二 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白 155
实验二十三 琥珀酸脱氢酶的作用及其可逆性抑制 158
实验二十四 真核基因组DNA的分离纯化 159
一、组织细胞DNA提取（酚抽提法） 160
二、外周血白细胞DNA提取（NaI法） 162
实验二十五 核酸凝胶电泳 163
一、DNA的琼脂糖凝胶电泳 165
二、聚丙烯酰胺凝胶电泳 167
实验二十六 DNA浓度的测定（紫外分光光度计法） 170
实验二十七 DNA为模板的PCR扩增 171
实验二十八 质粒DNA的提取（碱变性裂解法） 173
实验二十九 限制性核酸内切酶的酶切和鉴定 174
实验三十 载体与目的基因的连接 177
实验三十一 重组质粒转化大肠杆菌及初步筛选 180
实验三十二 免疫系统组分的分离及活性检测 181
一、小鼠胸腺、脾摘除术 181
二、小鼠淋巴细胞分离及活性检测 182
第十一章 研究创新型实验 183
实验三十三 肝糖原的提取和鉴定 183
实验三十四 不同组织ALT活性测定及温度、pH的影响 184
一、初用玻璃仪器的清洗 185
二、使用过的玻璃仪器的清洗 185
第三篇 专题篇 185
第一节 常用玻璃器皿的洗涤 185
第十二章 实验室基本操作 185
三、各种洗涤液的配方及使用 186
第二节 常用量器的校正 187
第三节 常用量器的正确使用 189
一、容量瓶 189
二、量筒 189
三、有分度吸量管 189
四、奥氏吸管 189
二、注意事项 190
三、加样器的校正 190
一、操作方法 190
第四节 加样器的使用和校正 190
第五节 试剂的选用和保管 191
一、化学试剂 191
二、试剂配制与使用原则 192
第六节 常用实验样品的制备 194
一、血液样品 195
二、尿液样品 195
三、组织样品 196
第七节 分光光度计的使用 196
一、721型分光光度计 196
二、722S分光光度计的使用 198
第十三章 实验室常用数据 201
第一节 基因工程抗体技术 206
第十四章 免疫学新技术 206
一、人－鼠嵌合抗体 207
二、单链抗体的构建 208
第二节 流式细胞术 208
一、基本原理 208
二、意义 209
三、仪器的操作和使用 210
第三节 酶联免疫斑点试验 211
第十五章 实验须知和实验报告的书写要求 214
第一节 实验须知 214
一、实验目的 214
二、实验要求 214
三、试剂使用 214
四、实验室规则 214
第二节 实验报告的书写要求 214