第一部分 分子生物学技术的基础理论 1
第一章 核酸的分离制备 1
一、核酸分离制备的总原则 1
二、核酸提取的主要步骤 1
三、制备核酸时应注意的问题 1
四、核酸提取 2
五、核酸沉淀 3
六、核酸定量 4
七、核酸保存 4
一、蛋白质分离纯化的一般原则 5
第二章 蛋白质的分离纯化 5
二、蛋白质分离纯化的主要方法 6
三、蛋白质纯度鉴定与含量测定 9
第三章 电泳技术 10
一、基本原理 10
二、影响电泳迁移率的因素 10
三、核酸电泳的指示剂与染色剂 11
四、不同波长紫外线对EB-DNA复合物的影响 12
第四章 核酸分子杂交 13
一、基本原理 13
二、探针的种类 13
三、探针的标记方法 14
四、核酸分子杂交的基本方法 15
五、常见的放射性核素标记物的比较 16
第五章 放射自显影术 17
一、放射自显影术的基本原理 17
二、放射自显影的特点 17
三、放射自显影的应用 18
第六章 PCR技术 19
一、PCR技术的基本原理 19
二、PCR主要相关技术 19
三、PCR技术在医学中的主要应用 21
二、检测的基本过程 23
三、生物芯片的类型 23
第七章 简介生物芯片技术 23
一、基本概念 23
四、生物芯片技术在医学领域中的应用 25
第八章 流式细胞术 27
第一节 流式细胞术的基本原理 27
第二节 流式细胞仪的分类和基本构造 28
第三节 流式细胞仪的主要技术指标 38
第四节 流式细胞仪应用的技术要求 39
第五节 流式细胞仪在医学研究中的应用 46
实验一 细菌的培养与收集 51
第二部分 分子生物学实验的基本方法 51
实验二 质粒DNA的提取 54
实验三 人外周血白细胞DNA的提取 59
实验四 哺乳动物细胞基因组DNA的提取 62
实验五 真核细胞总RNA的制备 65
实验六 真核细胞mRNA的提取 70
实验七 核酸的定量 73
实验八 DNA的限制性内切酶消化法 76
实验九 琼脂糖凝胶电泳法检测DNA 79
实验十 聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测DNA 81
实验十一 STR的检测方法 85
实验十二 低熔点琼脂糖凝胶回收DNA片段 88
实验十三 DNA分子的体外连接 90
实验十四 感受态细胞的制备及转化 93
实验十五 重组质粒的筛选 97
实验十六 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量 101
实验十七 等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点 105
实验十八 Western印迹法检测表达蛋白 108
实验十九 免疫荧光法检测重组蛋白 114
实验二十 放射免疫沉淀法检测重组蛋白 117
实验二十一 RT-PCR-微孔板杂交-ELISA法检测基因表达 121
实验二十二 DNA片段的印迹杂交 125
实验二十三 RNA片段的印迹杂交 130
实验二十四 放射性核素32P随机引物延伸标记法 136
实验二十五 光敏生物素标记DNA法 139
实验二十六 地高辛标记DNA探针 141
实验二十七 乙型肝炎病毒的检测方法 143
实验二十八 RT-PCR法检测HCV RNA 148
实验二十九 PCR-SSCP分析 152
实验三十 apoE多态性分析 157
实验三十一 凋亡细胞梯状条带电泳 161
实验三十二 流式细胞术检测细胞周期及DNA倍体分析 164
附录一 分子生物学实验中常用参数及试剂的配制 167
一、常见的市售酸碱 167
第三部分 附录 167
二、常用的缓冲液 168
三、常用酶的配制 173
四、常用贮存液的配制 175
五、杂交实验中封闭剂的配制与用途 178
六、放射性核素数据 179
七、常用物理系数及分子量标准 180
八、细菌培养基和抗生素 183
九、中国汉族等位基因频率表 184
附录二 分子生物学的重要知识点 188
一、名词理解 188
二、简答题 196