第一章 细胞培养概述 1
一、细胞培养发展简史 1
二、细胞培养的基本概念 3
三、细胞培养实验的基本要求 4
第二章 细胞培养准备技术 6
第一节 实验器材清洗、包装和消毒 6
一、常用的实验器材 6
二、清洗 7
三、包装 10
四、消毒 12
第二节 实验室常用的仪器设备使用和维护 18
一、净化台 18
二、自动双重纯水蒸馏器 19
三、抽气泵 20
四、压力蒸汽消毒器 21
五、电热恒温培养箱 22
六、电热恒温干燥箱 22
七、液氮生物容器 23
八、CO2培养箱 24
九、冰箱 27
第三节 动物细胞用液制备 27
一、蒸馏水 27
二、平衡盐溶液 28
三、天然培养基 30
四、合成培养基 32
五、血清细胞培养基 38
六、无血清细胞培养基 39
七、消化液 44
十一、20mmol/LL－谷氨酰胺 46
十、pH调整液 46
九、蛋白酶抑制剂 46
八、稳定剂 46
十二、抗菌素液 47
十三、细胞用液的分装方法和要求 48
思考题 50
第三章 细胞培养基本技术 52
第一节 细胞原代培养 52
一、乳鼠肺组织原代培养程序 52
二、原代细胞实验操作要领 55
三、原代细胞实验注意事项 56
四、原代细胞实验取材 57
五、原代细胞培养方法介绍 61
第二节 培养细胞的观察 67
一、培养细胞分型 67
二、细胞培养中的常用术语 69
三、培养细胞一代生长过程 70
四、细胞周期 77
五、培养细胞的生命期 78
第三节 培养细胞常规检查和生物学检测 81
一、培养细胞常规检查 81
二、培养细胞的生物学检查和鉴定 87
第四节 细胞传代培养 91
一、细胞传代方法 91
二、乳鼠原代肺细胞培养物传代 92
三、盖玻片条细胞培养法 94
四、死、活细胞鉴别试验 95
第五节 细胞冻存、复苏、运输和短期保存 97
一、影响冻存细胞活性的因素 97
二、细胞冻存方法 98
四、细胞复苏方法 101
三、组织细胞短期保存方法 101
五、细胞运输 102
六、引进细胞的方法 102
思考题 103
第四章 细胞培养研究技术 104
第一节 细胞的分离和纯化 104
一、成纤维细胞的分离和去除 104
二、骨髓和外周血有核细胞的纯化 107
三、肿瘤细胞的分离纯化 108
四、单核细胞和巨噬细胞的纯化 110
五、上皮细胞的纯化 111
六、细胞移速分离纯化 112
第二节 培养细胞活力检测方法 112
一、细胞克隆形成试验 112
二、细胞活性染色法 117
三、细胞四唑盐比色法 119
第三节 细胞形态学研究方法 120
一、培养细胞的固定 120
二、培养细胞常用染色法 123
三、细胞免疫化学染色 129
四、培养细胞透射电镜样品的制备 138
五、培养细胞扫描电镜样品的制备 139
第四节 细胞遗传学的检测方法 140
一、细胞DNA定量的测定 140
二、细胞DNA合成的测定 142
三、细胞DNA双参数的测定 145
四、人体外周血淋巴细胞染色体标本的制备 146
五、培养细胞染色体标本的制备 147
六、染色体G显带 148
七、姐妹染色单体区分染色法 155
第五节 显微摄影技术 157
一、显微镜的光学部件和显微照相操作 157
二、相差显微镜 175
三、荧光显微镜 179
第五章 原代细胞培养和分析 185
第一节 SD乳鼠心肌细胞的分离培养 185
一、准备 185
二、心肌细胞的分离培养 185
三、原代心肌细胞生长观察 186
四、讨论 189
第二节 大鼠血管平滑肌细胞的分离培养 190
一、准备 190
二、取材 190
四、原代血管平滑肌细胞生长观察 191
三、血管平滑肌细胞的分离培养 191
五、讨论 192
第三节 成人前脂肪细胞的分离培养 193
一、准备 193
二、前脂肪细胞的分离培养 194
三、原代前脂肪细胞生长观察 194
四、讨论 196
第四节 大鼠肺微血管内皮细胞的分离培养 196
一、准备 196
二、肺微血管内皮细胞的分离培养 196
三、原代肺微血管内皮细胞生长观察 197
四、讨论 199
附录一 国内外细胞库 200
附录二 动物常用的细胞注射技术 202
参考文献 206