分子生物学实验室规则 1
第一部分 基础实验 2
实验1细胞基因组DNA的提取 3
实验2酵母细胞总RNA的提取 8
实验3大肠杆菌质粒DNA的提取 14
实验4琼脂糖凝胶电泳分析及DNA片段的回收 17
实验5聚合酶链式反应扩增目的基因片段 23
实验6质粒DNA及PCR产物酶切后纯化、回收 33
实验7 DNA分子的体外重组 40
实验8大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒DNA转化实验 43
实验9 α-互补实验及重组质粒DNA的酶切鉴定分析 47
实验10重组工程菌的诱导表达实验 51
实验11 SDS-PAGE凝胶电泳分析蛋白产物 54
实验12 Southern杂交实验 59
实验13 Northern杂交实验 66
实验14 Western杂交实验 69
第二部分 综合(创新)实验 72
大豆Glycinin G2蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达研究 73
生物技术综合实验设计作业 84
实验报告写作要求 84
附录 常用数据、试剂配制、酶切位点等查询 85
1常用核酸蛋白换算数据 85
2常用琼脂糖凝胶电泳缓冲液的配制 85
3 Luria-Bertani培养基配制 86
4质粒提取所需试剂配制 86
5 TE缓冲液的配制(pH8.0) 86
6抗生素的使用浓度 86
7 IPTG储存液的配制(0.1mol/L) 86
8 X-gal储存液的配制(50 mg/mL) 86
9 SDS-PAGE凝胶电泳试剂 86
10考马斯亮蓝染色液的配制(100 mL) 87
11 SDS凝胶脱色液的配制(100 mL) 87
12丙烯酰胺凝胶电泳胶的配制 87
附表1配制SDS-PAGE丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所需溶液 87
附表2配制SDS-PAGE丙烯酰胺凝胶电泳5%浓缩胶所需溶液 88
附表3常用核酸的长度与相对分子质量 89
附表4常用DNA相对分子质量标准参照物 89
附表5常用蛋白质相对分子质量标准参照物 90
附表6氨基酸名称、缩写及其密码子 90
附表7常用压力单位换算表 91
附表8常用限制性内切酶酶切反应温度及识别位点一览表 92
参考文献 94