第一章 概述 1
第一节 转基因动物的产生和发展 1
一、转基因动物的产生 1
二、动物转基因技术的发展 2
三、转基因动物应用领域的拓展 7
第二节 转基因猪技术现状及应用前景 11
一、转基因猪技术现状 11
二、转基因猪的应用现状与前景 13
参考文献 17
第二章 猪的配子与胚胎操作技术 22
第一节 猪精液的采集、保存和输精技术 22
一、猪精液的采集 22
二、精液的质量检查和评定 23
三、精液的保存 26
四、输精技术 31
第二节 母猪的同期发情和超数排卵技术 34
一、母猪的同期发情技术 34
二、母猪的超数排卵技术 36
第三节 猪胚胎的采集和移植技术 38
一、胚胎的采集 38
二、胚胎的移植 43
第四节 猪卵母细胞体外成熟及体外受精技术 46
一、猪卵母细胞的采集 47
二、猪卵母细胞的体外成熟 48
三、猪精子的体外获能 56
四、体外受精技术 58
五、胞质内单精注射技术 61
第五节 猪体细胞核移植（克隆）技术 67
一、供体细胞的选择 69
二、供体细胞的制备方法 69
三、受体细胞的制备 72
四、核移植操作技术 73
五、融合及激活技术 76
六、手工克隆技术 78
七、重构胚的培养 79
八、重构胚的移植 81
九、猪体细胞核移植存在的问题及应用前景 82
第六节 猪的iPS技术 83
一、iPS细胞的制备技术 83
二、猪iPS技术的应用前景 91
三、iPS细胞目前存在的问题 92
第七节 配子与胚胎操作的环境控制 93
一、影响配子与胚胎操作的环境因素 93
二、灭菌技术 94
三、玻璃及塑料制品的清洗 96
四、配子与胚胎操作室的设计及环境管理 97
参考文献 99
第三章 猪的基因工程技术 112
第一节 转基因猪表达载体的构建 112
一、目的基因及其全长序列的获取 112
二、启动子的选择 116
三、报告基因 117
四、调控元件 118
五、动物基因工程常用载体 121
六、载体构建的一般流程 132
第二节 基因打靶技术及其策略 135
一、基因打靶载体的类型和构建方法 135
二、胚胎干细胞基因打靶 137
三、体细胞基因打靶 139
四、基因打靶技术的发展及复杂调控 139
五、基因打靶技术的应用和展望 141
第三节 RNAi基因沉默载体的构建 142
一、RNAi的研究 142
二、RNAi的分子机制 143
三、shRNA表达载体构建 144
四、基因沉默技术在猪遗传改良上的应用 146
第四节 其他猪基因组靶向修饰技术 147
一、锌指核酸酶 147
二、TALEN 149
三、PhiC31整合酶 149
参考文献 151
第四章 猪的转基因技术 155
第一节 显微注射法 155
一、原核胚的获取 156
二、基因的显微注射 157
三、注射胚的移植 160
四、原核注射法制备转基因猪的效率 162
五、提高转基因效率的措施 163
六、通过显微注射法实现基因的定位修饰和整合 165
第二节 猪精子介导法 166
一、精子介导转基因的机理 166
二、精子介导制备转基因猪的方法 168
第三节 体细胞核移植介导法 170
一、供体细胞的选择及建系 171
二、细胞的基因转染 171
三、细胞筛选和阳性单克隆培养 175
第四节 逆转录病毒感染法 177
一、逆转录病毒载体的构建 177
二、利用逆转录病毒载体制备转基因猪的路径 181
第五节 其他制备转基因猪的方法 183
一、精原干细胞途径 183
二、人工染色体技术 189
参考文献 191
第五章 转基因猪的检测 197
第一节 可视化识别检测 197
一、荧光标记 197
二、肤色标记 198
第二节 整合检测 198
一、样品的采集 198
二、DNA的提取 198
三、聚合酶链式反应（PCR） 200
四、DNA斑点杂交 202
五、Southern印记杂交 204
六、外源基因整合位点的检测——染色体原位杂交技术 208
七、转基因整合拷贝数的测定 210
第三节 转基因猪外源基因的转录分析——mRNA检测 212
一、组织或细胞中总RNA提取 212
二、Northern印迹杂交 215
三、RNase保护分析 217
四、逆转录—聚合酶链式反应（RT-PCR） 219
五、RNA斑点杂交 220
第四节 转基因猪翻译水平——蛋白质产物检测 220
一、蛋白质印迹技术 221
二、免疫组织化学检测 225
第五节 转基因猪表达产物的生物活性分析及功能测试 230
一、表达产物的生物活性分析 230
二、表达产物的功能测试 233
参考文献 235
第六章 转基因猪的安全调控技术 237
第一节 转基因猪的安全性分析及解决方案 237
一、转基因猪对食品的安全性分析及解决方案 237
二、转基因猪对环境的安全性分析及解决方案 241
三、转基因猪自身的安全性分析及解决方案 242
第二节 标记基因的删除技术 243
一、hit and run法 243
二、双置换法 244
三、位点特异性重组技术 245
第三节 组织特异性表达 252
第四节 外源基因的诱导表达 254
一、四环素诱导表达系统 254
二、蜕皮激素诱导表达系统 257
三、他克莫司／雷帕霉素诱导系统 257
四、RU486诱导系统 258
参考文献 259
第七章 转基因猪新品种培育 262
第一节 外源基因在G0代中的整合状况及遗传稳定性 262
一、随机整合 262
二、定位整合 267
第二节 G0代转基因猪的选择 267
一、选择的内容和目标 267
二、选择程序 268
第三节 转基因猪纯合子的建立 269
一、通过常规繁育技术建立转基因猪纯合子 270
二、通过重复打靶技术建立转基因猪纯合子 271
三、基因编辑技术 273
第四节 转基因猪新品种的培育 274
一、转基因猪新品种的培育目标 274
二、转基因猪新品系的建立 274
三、转基因猪新品种的建立 275
四、转基因猪新品种的利用 275
五、转基因猪种质资源的保存 276
参考文献 276
第八章 转基因猪的安全管理和安全评价 279
第一节 我国农业转基因生物的安全管理体系 279
一、我国农业转基因生物安全管理的法规建设 279
二、我国农业转基因生物的管理和监控体系 280
第二节 转基因猪的安全控制 281
一、转基因实验猪场的安全控制 282
二、转基因实验猪场的卫生防疫 283
三、转基因实验猪场猪群处置规则 285
第三节 转基因猪的安全评价 286
一、转基因猪安全评价的内容 286
二、各阶段的申报程序 290
参考文献 291