第一章 质粒DNA的分离、纯化和鉴定 1
第一节 概述 1
第二节 碱法提纯质粒DNA 4
一、设备 4
二、材料 5
三、试剂 5
四、操作步骤 6
五、注意事项 6
第三节 Axygen质粒提取试剂盒提纯质粒DNA 7
一、设备 7
二、材料 7
三、试剂 7
四、操作步骤 7
五、注意事项 8
第四节 离心机的使用及注意事项 8
一、离心机的使用步骤 8
二、离心机使用的注意事项 8
第二章 DNA琼脂糖凝胶电泳和RNA甲醛琼脂糖凝胶变性电泳 9
第一节 概述 9
第二节 DNA的琼脂糖凝胶 11
一、设备 11
二、材料 11
三、试剂 11
四、操作步骤 11
五、注意事项 12
第三节 RNA甲醛琼脂糖凝胶变性电泳 12
一、设备 13
二、材料 13
三、试剂 13
四、操作步骤 13
五、注意事项 13
第三章 质粒DNA的限制性酶切鉴定、割胶回收与纯化 14
第一节 概述 14
第二节 设备、材料及试剂 15
一、设备 15
二、材料 15
三、试剂 16
第三节 操作步骤 16
一、酶切反应 16
二、酶切产物的电泳分离和鉴定 16
三、酶切产物的割胶回收 16
四、注意事项 17
第四章 特异片段与载体的连接反应 19
第一节 概述 19
一、带有非互补粘性末端DNA片段的连接 20
二、带有相同粘性末端DNA片段的连接 20
三、带有平末端DNA片段的连接 20
四、适当改造的DNA片段的连接 20
五、PCR介导的DNA片段的连接 20
第二节 设备、材料及试剂 22
一、设备 22
二、材料 22
三、试剂 22
第三节 操作步骤 22
一、外源片段和pMD18-T载体的连接反应（10μl体系） 22
二、外源片段和质粒载体的连接反应（10μl体系） 22
三、注意事项 23
第五章 大肠杆菌感受态细胞的制备及连接产物的转化、鉴定 24
第一节 概述 24
一、大肠杆菌感受态细胞的制备 24
二、影响细菌转化效率的因素 25
三、转化子的鉴定 25
第二节 设备、材料及试剂 26
一、设备 26
二、材料 26
三、试剂 26
第三节 操作步骤 26
一、感受态细胞的制备 26
二、连接产物的转化 27
三、转化子的鉴定 28
第六章 PCR扩增技术 30
第一节 概述 30
一、PCR技术的基本原理 30
二、参与PCR反应体系的因素及其作用 30
三、PCR反应参数 32
第二节 设备、材料及试剂 34
一、设备 34
二、材料 34
三、试剂 34
第三节 操作步骤 34
一、常规PCR反应 34
二、菌落PCR 35
三、电泳 35
四、PCR产物的纯化 35
五、注意事项 36
第七章 基因组DNA的提取 37
第一节 概述 37
第二节 从植物组织提取基因组DNA 37
一、设备 37
二、材料 38
三、试剂 38
四、操作步骤 38
五、注意事项 39
第三节 从动物组织提取基因组DNA 40
一、设备 40
二、材料 40
三、试剂 40
四、操作步骤 40
第四节 细菌基因组DNA的制备 40
一、设备 40
二、材料 41
三、试剂 41
四、操作步骤 41
第五节 真菌基因组DNA提取 41
一、设备 41
二、材料 41
三、试剂 41
四、操作步骤 42
第六节 基因组DNA的纯度鉴定 42
第八章 动植物总RNA的提取 43
第一节 概述 43
第二节 设备、材料及试剂 44
一、设备 44
二、材料 44
三、试剂 44
第三节 实验操作 44
一、Trizol法提取动植物总RNA的基本步骤 44
二、注意事项 44
三、如何处理RNA中的DNA 45
四、RNA纯度鉴定 45
第九章 RT-PCR技术 46
第一节 概述 46
第二节 两步法RT-PCR 47
一、设备 47
二、材料 47
三、试剂 47
四、操作步骤 47
五、注意事项 48
第十章 蛋白质的SDS-PAGE电泳及WesterNblot分析 49
第一节 概述 49
第二节 设备、材料及试剂 50
一、设备 50
二、材料 50
三、试剂 50
第三节 操作步骤 52
一、蛋白的SDS-PAGE 52
二、WesterNblot技术 53
三、快速银染检测SDS-PAGE胶中蛋白 57
第十一章 核酸分子杂交技术 58
第一节 核酸探针标记的方法 58
一、双链DNA探针及其标记方法 58
二、单链DNA探针 60
三、末端标记DNA探针 63
四、寡核苷酸探针 64
五、RNA探针 64
第二节 几种常见的核酸杂交 66
一、SoutherNblot 66
二、NortherNblot 70
三、Small RNA（小RNA） NortherNblot杂交 72
四、地高辛标记的SoutherNblot杂交 74
第三节 杂交反应的条件及参数的优化 76
第十二章 RFLP和RAPD技术 77
第一节 概述 77
第二节 RFLP技术 78
一、设备 78
二、材料 78
三、试剂 78
四、操作步骤 78
第三节 RAPD技术 79
一、设备 79
二、材料 79
三、试剂 79
四、操作步骤 80
五、注意事项 80
第十三章 蛋白的原核表达技术 81
第一节 概述 81
第二节 基因的诱导表达及表达产物的分析 86
一、设备 86
二、材料 86
三、试剂 86
四、操作步骤 86
五、注意事项 87
第三节 6× His融合蛋白的大量表达及8M尿素变性条件下用镍离子纯化蛋白 87
一、设备 87
二、材料 87
三、试剂 87
四、操作步骤 88
五、注意事项 88
第四节 镍离子在自然条件下纯化6× His融合蛋白 89
一、设备 89
二、材料 89
三、试剂 89
四、操作步骤 89
五、注意事项 90
第五节 GST融合蛋白的表达及其亲和层析纯化 90
一、设备 90
二、材料 90
三、试剂 90
四、操作步骤 90
第六节 MBP融合蛋白的表达及其亲和层析纯化 91
一、设备 91
二、材料 91
三、试剂 91
四、操作步骤 91
第十四章 酶联免疫吸附试验 93
第一节 概述 93
第二节 设备、材料及试剂 97
一、设备 97
二、材料 97
三、试剂 97
第三节 操作步骤 98
一、直接ELISA步骤 98
二、间接ELISA检测抗青霉素抗体效价或青霉素抗体 99
三、抗原包被ELISA（ACP-ELISA）检测南方水稻黑条矮缩病毒（SRBSDV）的步骤 99
四、DAS-ELISA测乙肝病毒步骤 100
五、TAS-ELISA的步骤 100
六、酶标记抗原竞争ELISA测三聚氰胺的步骤 100
七、酶标记抗体竞争ELISA测青霉素 101
八、酶标记二抗竞争ELISA测氯霉素 101
九、dot-ELISA检测水稻中南方水稻黑条矮缩病毒（SRBSDV）的步骤 101
十、dot-ELISA检测灰飞虱中水稻黑条矮缩病毒（RBSDV）的步骤 102
附录 104
附录1 细菌、酵母及核酸的贮存 104
一、细菌保存 104
二、酵母贮存 104
三、DNA贮存 105
四、RNA贮存 105
附录2 常用试剂、溶液及缓冲液的配制 105
一、基本要求 105
二、浓酸和浓碱的浓度 106
三、常用贮液与溶液 106
四、电泳缓冲液、染料和凝胶加样液 112
附录3 常用培养基和抗生素的配制 115
一、一般要求 115
二、常用培养基 116
三、常用抗生素 117
参考文献 118