第1章 标准物质基础知识 1
1.1标准物质定义和基本特性 1
1.1.1标准物质定义 1
1.1.2标准物质基本特征及满足条件 2
1.1.3标准物质相关术语 4
1.2标准物质分类分级 6
1.2.1标准物质的分类 6
1.2.2标准物质的分级 7
1.3标准物质定值 8
1.3.1准确度/不确定度 8
1.3.2标准物质定值方式的选择 9
1.3.3对特性量值测量时的影响参数和影响函数的研究 10
1.3.4定值数据的统计处理 10
1.3.5定值不确定度的估计 11
1.3.6定值结果的表示 11
1.4标准物质量值溯源 11
1.4.1国际单位制 11
1.4.2基准标准物质 12
1.4.3基准测量方法 13
1.5标准物质使用一般原则 14
1.5.1标准物质使用的一般原则 14
1.5.2选择标准物质的注意事项 15
第2章 标准物质管理 17
2.1国际标准化组织的标准物质管理 17
2.1.1国际标准化组织下设的全球标准化物质协调机构 17
2.1.2国际标准化组织与标准物质研制相关的技术文件 18
2.1.3国际标准化组织对标准物质研制的技术要求 19
2.2我国标准物质管理 25
2.2.1标准物质管理规章制度 25
2.2.2标准物质类别和编号 26
2.2.3我国标准物质管理机构 29
2.2.4我国标准物质申报要求 30
2.2.5标准物质评审 32
2.2.6标准物质证书 35
第3章 转基因生物标准物质类型及特点 39
3.1转基因生物标准物质分类 39
3.1.1基体标准物质 39
3.1.2基因组DNA标准物质 41
3.1.3质粒DNA标准物质 42
3.1.4蛋白质标准物质 45
3.1.5不同类型转基因生物的比较 45
3.2转基因生物标准物质特性量值含义 46
3.2.1转基因含量定义 46
3.2.2质量分数 47
3.2.3拷贝数分数 47
3.2.4两种量值方式比较 47
3.3转基因生物标准物质定值关键技术 51
3.3.1重量法 51
3.3.2实时荧光PCR法 51
3.3.3数字PCR法 53
3.3.4测序法 56
3.4转基因生物标准物质溯源性 57
3.4.1基本概念 57
3.4.2溯源性体系 58
3.4.3溯源性过程 59
第4章 转基因生物标准物质研制进展 62
4.1欧盟 63
4.1.1基体标准物质 64
4.1.2质粒标准物质 69
4.2美国 70
4.2.1基体标准物质 72
4.2.2基因组DNA标准物质 73
4.3日本 74
4.3.1基体标准物质 74
4.3.2质粒DNA标准物质 74
4.4中国 75
4.5转基因生物标准物质研制面临的挑战 76
4.5.1标准物质量值的表达单位 76
4.5.2标准物质的形态 77
4.5.3基体标准物质浓度 77
4.5.4适合中国国情的“量值”表达方式及其技术实现途径 77
第5章 转基因生物基体标准物质制备 80
5.1候选物繁殖 81
5.2候选物鉴定 82
5.2.1一般要求和原则 82
5.2.2候选物鉴定常用技术 84
5.2.3转基因水稻TT51 -1基体标准物质候选物繁殖与鉴定 87
5.3候选物加工 89
5.3.1种子 89
5.3.2种子粉末 91
5.4标准物质包装 96
5.4.1种子 96
5.4.2粉末 97
5.5均匀性检验 98
5.5.1检验方案及实验设计 98
5.5.2测量方法 99
5.5.3数据统计分析 100
5.6稳定性检验 104
5.6.1短期稳定性 104
5.6.2长期稳定性 105
5.6.3测量方法 105
5.6.4数据统计分析 105
5.7定值 107
5.7.1特性值测定策略及方法 107
5.7.2不确定度合成 109
5.7.3赋值 110
5.8包装与储运 111
5.9试用与评价 111
5.9.1使用与评价要求 111
5.9.2试用评价内容 111
5.9.3出具试用评价报告 112
第6章 基因组DNA标准物质制备 113
6.1候选物的基本要求 113
6.1.1候选物的基本要求 113
6.1.2候选物鉴定技术 114
6.2基因组DNA提取与纯化 114
6.2.1 CTAB法 114
6.2.2其他方法 115
6.3基因组DNA质量评价 117
6.3.1基因组DNA质量要求 117
6.3.2基因组DNA质量评价方法 117
6.3.3不同DNA浓度测定方法比较 120
6.4分装 121
6.5均匀性检验 122
6.5.1检验方法 122
6.5.2均匀性评价方法 122
6.5.3均匀性不确定度 122
6.6稳定性检验 123
6.6.1稳定性检验的原理 123
6.6.2短期稳定性 123
6.6.3长期稳定性 124
6.6.4稳定性评价方法 124
6.6.5有效期限的确定 124
6.6.6稳定性不确定度 124
6.7定值 124
6.7.1定值策略 124
6.7.2实验数据的检验 125
6.7.3标准值及定值不确定度 125
6.8不确定度分析 126
6.9包装与保存 127
6.10试用与评价 127
第7章 质粒DNA标准物质制备 128
7.1质粒分子设计与构建 128
7.1.1质粒分子的种类与设计 128
7.1.2质粒分子的构建 130
7.1.3质粒分子的鉴定 134
7.2质粒繁殖 134
7.3质粒DNA提取与纯化 135
7.3.1 SDS碱裂解法 135
7.3.2试剂盒法 137
7.4质粒DNA质量评价 137
7.4.1琼脂糖凝胶电泳法 138
7.4.2酶切法 138
7.5可替代性分析 138
7.5.1定性检测可替代性分析 138
7.5.2定量检测可替代性分析 139
7.6分装 141
7.7均匀性检验 142
7.8稳定性检验 142
7.8.1短期稳定性 142
7.8.2长期稳定性 142
7.8.3稳定性评价方法 143
7.8.4稳定性不确定度 143
7.9定值 144
7.9.1定值策略 144
7.9.2标准值及定值不确定度 144
7.10包装与储运 145
7.11试用与评价 145
第8章 转基因生物标准物质应用 146
8.1转基因生物标准物质在仪器设备检定/校准中的应用 146
8.1.1使用转基因生物有证标准物质的校准 147
8.1.2使用转基因标准品的校准 147
8.1.3转基因标准物质在仪器设备自校准中的应用 148
8.2转基因生物标准物质在方法评价中的应用 149
8.2.1定性方法的评价 149
8.2.2定量方法的评价 151
8.2.3实例说明 152
8.3转基因生物标准物质在检测中的应用 154
8.3.1检测体系控制 154
8.3.2标准曲线制作 155
8.3.3转基因生物标准物质在检测中的应用实例 155
8.4转基因生物标准物质在质量控制中的应用 159
8.4.1实验室内部质量控制 160
8.4.2实验室间质量控制 162
8.4.3标准物质在质量控制中的作用 163
8.5转基因生物标准物质在能力验证中的应用 163
8.5.1能力验证的实施 163
8.5.2能力验证结果评价 164
附录1商业化转基因生物标准物质目录 166
附录2国内外相关标准物质研制及使用标准 172
附录3国内外标准物质相关数据库 173
附录4 TT51-1水稻基体标准物质研制报告范例 174
附录5 T25玉米基因组DNA标准物质研制报告范例 205
附录6 MON810玉米质粒DNA标准物质研制报告范例 213
附录7缩略语 234
参考文献 238