第一章 品种鉴定技术的发展历程及展望 1
1.为什么将品种分子鉴定技术也称为DNA指纹鉴定技术? 1
2.DNA指纹鉴定技术的发展历程? 2
3.适于品种鉴定的分子标记技术的特点? 5
4.与其他标记相比,SSR标记为什么能广泛应用于品种DNA指纹鉴定中? 5
5.RAPD、AFLP等标记技术为什么在玉米品种鉴定中没有得到广泛应用? 6
6.SSR技术用于DNA指纹鉴定过时了吗,是否会被SNP技术取代? 7
7.SNP检测平台有哪些?有发展潜力的有哪些? 9
8.测序技术能否应用于品种鉴定中? 11
第二章 基础知识 13
9.种子检验中常用的检测方法有哪些?什么是生化标记?什么是分子标记? 13
10.分子标记的种类及其主要优缺点 14
11.什么是SSR?SSR、STR、微卫星三者的区别和联系是什么? 15
12.什么是核心引物? 16
13.什么是核心引物组合法?与特征谱带法、引物组合法相比有什么区别? 16
14.单个核心引物和一套核心引物组合筛选的原则有什么异同?为什么有的单个引物评价较好,但没有入选到核心引物组合中? 17
15.引物位点的等位变异个数与多态性的关系? 19
16.什么是共显性?与双亲互补型标记的关系 20
17.在农作物种子检验中经常出现的几个概念,如参照样品、对照样品、内控样品有何区别? 21
18.种子检验中的标准样品和植物新品种DUS测试中的标准品种是否相同? 22
19.在分子技术领域经常出现BIN这个概念,如何理解BIN的含义? 22
20.中性标记适合用于品种鉴定吗? 23
第三章 SSR指纹鉴定技术程序 25
21.采用玉米不同器官组织提取DNA对品种鉴定有无影响? 25
22.在玉米品种DNA指纹鉴定中如何选用合适的DNA提取方法? 26
23.荧光毛细管电泳检测平台与普通变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测平台相比有何优势? 27
24.荧光毛细管电泳和普通PAGE电泳检测平台上对适合于在一起电泳的引物的选择是否相同? 28
25.在核心引物筛选阶段,不同的电泳检测平台对引物评价是否存在差异? 31
26.为什么普通PAGE电泳试验在夏季高温和冬季低温季节容易出现异常? 33
27.不同的示踪染料在不同浓度聚丙烯酰胺凝胶电泳及琼脂糖凝胶电泳中迁移时分别代表片段长度是多少? 34
28.为保证分子实验结果的准确无误,有哪些具体措施? 35
29.荧光毛细管电泳检测平台上特异峰与非特异峰如何甄别? 36
30.荧光毛细管电泳检测平台上出现的各种类型电泳峰有哪些? 37
31.SSR指纹数据的记录方式主要有哪几种? 39
32.如何实现普通PAGE电泳和荧光毛细管电泳数据的有效整合? 42
33.品种分子检测(主要指基于SSR技术的)与转基因检测有何异同? 43
第四章 种子真实性分子鉴定 45
34.种子真实性与品种特异性的区别和联系? 45
35.种子真实性鉴定中涉及的已知品种、临时品种和淘汰品种各自包括哪些材料? 46
36.目前玉米种子真实性鉴定具体需求及鉴定方式有哪些? 47
37.玉米品种鉴定与人类个体鉴定相比有何特殊性? 50
38.已进入商业化应用的人类个体识别(含亲子鉴定)试剂盒有哪些? 52
39.与人类个体识别试剂盒相比,玉米种子真实性鉴定试剂盒有何特点? 52
40.如何借鉴人类亲子鉴定的经验开展玉米亲子鉴定? 53
41.真实性检测与转基因检测在控制污染方面有何异同? 54
42.送检样品种子纯度对真实性鉴定有何影响? 56
43.在差异位点判定上,所检玉米材料是杂交种还是自交系有区别吗? 56
44.玉米真实性检测样品制备时,有几种取样方式,如何选择合适的取样方案? 57
45.采用混合样品DNA进行品种比较时,什么情况下需进一步放大单株检测? 59
46.有人认为进行种子真实性鉴定时需要先剔杂再进行检测,这种做法是否合理? 60
47.大规模开展玉米种子真实性鉴定需具备哪些条件? 60
48.真实性鉴定在我国种子质量管理工作中的应用历程? 61
49.农业部已认定了哪些具有真实性检测能力的种子检测机构? 61
第五章 品种纯度分子鉴定 63
50.纯度鉴定与一致性鉴定的区别和联系? 63
51.玉米品种(主要指单交种)一致性对种子纯度鉴定有何影响? 65
52.适于玉米杂交种纯度鉴定的引物筛选与适于真实性鉴定的引物筛选有何异同? 66
53.如何设计玉米单交种种子纯度鉴定的具体方案? 66
54.适于种子纯度鉴定的引物筛选确定是针对品种还是针对特定样品? 68
55.纯度鉴定中,固定鉴定引物组合和针对特定品种筛选特异引物哪种方案更好? 69
56.如何保证不同检验员针对同一样品的纯度鉴定均能获得客观真实的结果? 71
57.影响田间小区种植纯度鉴定结果的因素有哪些? 72
58.种子发芽率对田间小区种植鉴定和室内DNA指纹鉴定的纯度检测结果的影响一样吗? 74
59.玉米杂交种种子纯度鉴定时,一般要求提供制种双亲。如果出现未提供双亲,或只提供一个亲本,或提供的亲本并非待测杂交种制种时所用亲本种子,这些情况对玉米杂交种纯度DNA指纹鉴定有无影响? 75
60.玉米已知品种标准DNA指纹库在玉米种子纯度鉴定工作中发挥了什么作用? 76
第六章 玉米品种标准DNA指纹库 77
61.玉米品种标准DNA指纹数据库在品种鉴定中有哪些用途? 77
62.如何保证玉米品种标准DNA指纹库建库数据的准确性和完整性? 80
63.玉米标准DNA指纹库采用了哪些先进技术手段保证建库工作的高效性? 81
64.玉米品种标准DNA指纹库中的核心信息包括哪些? 83
65.玉米品种标准DNA指纹库在数据存储内容的设计方面如何保证其实用性? 83
66.玉米品种标准DNA指纹库构建中所用的数据分析软件SSR analyser有什么优点? 85
67.玉米品种标准DNA指纹库解决了哪些以往常规检测中不易解决的问题? 86
68.玉米DNA指纹数据库构建的技术难点体现在什么地方? 87
69.为什么玉米品种标准DNA指纹数据库采集的数据是Allele(等位变异)而不是Size(片段大小),二者在数据统计上孰优孰劣? 88
70.玉米品种标准DNA指纹库建成后在玉米真实性鉴定中发挥了什么作用? 89
71.玉米品种标准DNA指纹数据库结构设计可否推广于不同作物类型和不同标记类型? 90
第七章 DNA指纹分子检测标准 91
72.我国已制定或列入制定计划的分子检测标准有哪些? 91
73.在现行的玉米品种DNA指纹鉴定标准中,为什么将差异位点数作为鉴定品种之间关系的依据? 92
74.行业标准《植物品种鉴定DNA指纹方法总则》与BMT分子测试指南的关系? 93
75.在总则中为什么没有推荐具体的DNA提取方法,但推荐了具体的电泳检测平台? 94
76.在总则中品种鉴定所需样品分析数量是如何确定的? 95
77.总则中差异位点是如何判定的?与不同物种有关还是与不同繁殖方式有关? 97
78.为什么要对农业行业标准《玉米品种鉴定DNA指纹方法》进行修订? 97
79.我国制定的玉米品种鉴定DNA指纹方法标准与国际上同类标准的关系? 99
80.在修订后的农业行业标准《玉米品种鉴定SSR标记法》中提供的参照品种名单是如何选取的? 100
第八章 DNA指纹与品种权保护 103
81.UPOV的BMT会议上提出的分子技术在DUS测试中应用的可能方案有哪些? 103
82.DNA指纹数据库如何在品种DUS测试中发挥作用? 104
83.DNA指纹数据库如何在品种侵权鉴定中发挥作用? 105
84.DNA指纹鉴定在我国玉米品种侵权案司法鉴定实践中的应用情况? 106
85.按照与表型的相关程度,可将分子标记分为几类? 107
86.什么是依赖性派生品种? 108
87.仿冒雷同品种与依赖性派生品种的含义一样吗? 109
88.玉米品种权保护标准样品DNA指纹库构建的历程? 109
89.UPOV公约1978年文本与1991年文本的主要区别? 110
90.农业部种子执法年行动从哪年开始?发挥了什么作用? 111
第九章 DNA指纹与品种区试审定 113
91.我国将DNA指纹技术应用于玉米区试种子真实性及一致性检测中的历程? 113
92.承担国家玉米区试品种DNA指纹检测的单位有哪些,具体分工如何? 115
93.DNA指纹技术在玉米区试中应用为什么采取了逐步推进的方式? 116
94.国家玉米区试样品从哪年开始入库保藏?保藏区试样品具有什么价值? 117
95.为什么国家玉米区试中仿冒雷同品种的检出量自2006年以后明显增多? 118
96.国家玉米区试中仿冒雷同品种的主要类型有哪些? 119
97.DNA指纹技术引入后,国家玉米区试中同名更换现象是否得到有效控制? 119
98.DNA指纹技术引入后,国家玉米区试中品种一致性情况是否得到显著改善? 120
99.DNA指纹技术在应用于国家玉米区试种子真实性检测过程中是如何避免结果误判的? 121
100.国家玉米区试中对真实性或一致性有问题的品种是如何处理的? 122
主要参考文献 124