第1章 医学实验研究的基本过程 1
1.1 实验选题 1
1.1.1 原始想法或问题的提出 2
1.1.2 文献检索及批判性文献综述 3
1.1.3 形成假说及选题陈述 3
1.1.4 科研选题的一般要求 5
1.2 实验设计 6
1.2.1 实验设计的基本原则 6
1.2.2 实验设计的内容 7
1.3 实验研究计划的实施 11
1.3.1 实验开始前的准备工作 11
1.3.2 实验的预试验 13
1.3.3 正式实验时应注意的问题 13
1.4 实验数据的处理与统计学分析 14
1.4.1 统计分析的基本概念 15
1.4.2 质反应资料的统计分析 17
1.4.3 量反应资料的统计分析 20
1.4.4 剂量依赖关系分析 24
1.5 实验研究论文的撰写 25
1.5.1 医学研究论文撰写的基本要求 25
1.5.2 医学研究论文的格式与写法 26
1.6 实验研究论文交流报告中应注意的问题 28
1.7 实验研究论文报告的PPT运用 29
1.7.1 关于PPT模板 30
1.7.2 关于PPT文字 30
1.7.3 关于PPT图表 31
1.7.4 关于PPT内容 32
1.8 医学文献检索基本知识及技巧 32
1.8.1 医学文献的类型 32
1.8.2 医学文献检索常用方法 33
1.8.3 医学文献检索的步骤 35
1.9 医学实验研究综述撰写的基本要求 36
1.9.1 选题和搜集阅读文献 36
1.9.2 拟定撰写提纲 37
1.9.3 格式与写法 37
附：学生设计方案举例 39
第2章 实验动物基本知识 42
2.1 实验动物的分类 42
2.1.1 按动物学分类 42
2.1.2 按遗传学控制方法分类 42
2.1.3 按微生物学控制方法分类 46
2.2 常用实验动物的生物学特征与应用 47
2.2.1 小鼠 47
2.2.2 大鼠 53
2.2.3 豚鼠 57
2.2.4 家兔 58
2.2.5 犬 62
2.2.6 猫 63
2.2.7 小型猪 64
2.2.8 非人灵长类 65
2.3 实验动物的选择原则 67
2.3.1 选用与人体结构、机能、代谢及疾病特征相似的动物 67
2.3.2 选用对实验因素最为敏感的实验动物 68
2.3.3 选用标准化和模型性状显著且稳定的动物 68
2.3.4 选用解剖、生理特点符合实验目的要求的动物 68
2.3.5 选用人畜共患疾病的实验动物和传统应用的实验动物 69
2.3.6 选择易获得、经济、易饲养管理的实验动物及考虑伦理道德与“3R”原则 69
2.4 选择实验动物应注意的问题 69
2.4.1 年龄及体重 69
2.4.2 性别 70
2.4.3 生理状况 70
2.4.4 健康状况 70
2.4.5 微生物等级 71
2.4.6 遗传背景 71
2.5 实验动物福利与立法保护 71
2.5.1 动物福利的渊源与立法保护 71
2.5.2 动物福利的内涵 72
2.5.3 “3R”原则 73
第3章 常用人类疾病动物模型的复制 75
3.1 实验性高血压模型 75
3.1.1 自发性高血压大鼠 76
3.1.2 肾血管性高血压大鼠 76
3.1.3 腹主动脉缩窄法高血压大鼠 77
3.1.4 DOCA-盐高血压模型 77
3.2 心肌缺血模型（在体、离体） 77
3.2.1 离体心肌缺血模型 78
3.2.2 急性心肌缺血模型 78
3.2.3 慢性心肌缺血模型 80
3.3 动脉粥样硬化模型 81
3.3.1 动物的选择 81
3.3.2 高脂饲料加药物模型 81
3.3.3 免疫损伤注射牛血清法 82
3.3.4 利用基因敲除或转基因动物制备AS模型 82
3.4 血栓实验模型 82
3.4.1 体外血栓形成法 83
3.4.2 体内血栓形成法 84
3.5 肿瘤模型 86
3.5.1 诱发性肝癌模型 86
3.5.2 移植性肝癌模型 87
3.6 其他动物模型 89
3.6.1 急性肝损伤模型 89
3.6.2 糖尿病模型 90
3.6.3 免疫缺陷动物模型 92
3.6.4 阿尔茨海默病大鼠模型 93
第4章 实验研究常用技术与方法 96
4.1 组织学光学显微镜技术 96
4.1.1 组织石蜡包埋切片技术 96
4.1.2 石蜡切片苏木素-伊红染色技术 98
4.1.3 骨磨片大理紫染色技术 100
4.1.4 血涂片Wright氏染色技术 101
4.1.5 运动终板压片氯化金染色技术 103
4.1.6 石蜡切片网状纤维银染法 104
4.2 组织化学光学显微镜技术 105
4.2.1 糖过碘酸-Schiff（PAS）显示法 105
4.2.2 核酸Feulgen显示法 107
4.2.3 核酸吖啶橙显示法 108
4.2.4 蛋白质茚三酮组织化学显示法 110
4.2.5 脂类四氧化锇显示法 111
4.2.6 酶组织化学 112
4.3 免疫组织化学光学显微镜技术 117
4.3.1 免疫酶 118
4.3.2 免疫荧光法 121
4.3.3 免疫金法 123
4.3.4 免疫组织化学多重染色 124
4.4 电子显微镜技术 128
4.4.1 超薄切片技术 130
4.4.2 电镜酶细胞化学技术 143
4.4.3 电镜免疫细胞化学技术 147
4.4.4 离子细胞化学技术 149
4.4.5 示踪细胞化学技术 151
4.4.6 电镜负染色技术 152
4.4.7 电子显微镜冷冻蚀刻技术 154
4.4.8 扫描电子显微镜样品制备技术 156
4.4.9 扫描电镜血管铸型样品制备方法 158
4.5 细胞生物学方法 160
4.5.1 细胞培养的基本技术 160
4.5.2 培养细胞生长状况的观察和常规研究方法 168
4.5.3 细胞组分的分离与分析 174
4.5.4 细胞内分子的示踪 179
4.5.5 细胞转染技术 184
4.5.6 基因表达分析 187
4.5.7 细胞周期分析 189
4.5.8 细胞凋亡的测定 191
4.5.9 细胞黏附分析 197
4.5.10 细胞的能动性 198
4.5.11 细胞生物学研究中常用药物 201
4.6 核酸的分离和纯化 202
4.6.1 哺乳动物基因组DNA的提取 202
4.6.2 琼脂糖凝胶电泳技术 204
4.6.3 真核细胞RNA的提取和纯化 206
4.7 聚合酶链式反应 209
4.7.1 逆转录PCR 210
4.7.2 实时定量PCR 212
4.8 基因克隆 217
4.8.1 DNA限制性内切酶和连接酶 217
4.8.2 感受态大肠杆菌的制备和转化 221
4.8.3 质粒DNA的提取 224
4.8.4 基因表达 228
4.9 蛋白质与蛋白质组分析技术 231
4.9.1 蛋白质的提取与浓度测定 231
4.9.2 双向凝胶电泳实验技术 234
4.9.3 SDS凝胶蛋白质检测——凝胶染色 241
4.9.4 免疫印迹 244
4.9.5 免疫共沉淀 249
4.9.6 哺乳动物细胞双杂交系统 252
4.10 人类染色体标本的制备及G显带观察与核型分析 254
4.10.1 人类外周血淋巴细胞培养及染色体标本的制备 255
4.10.2 人类染色体G显带标本的观察及核型分析 256
4.10.3 中期染色体荧光原位杂交 258
4.11 PCR-RFLP分析细胞周期蛋白D1（CCND1）基因G870A多态性 260
4.11.1 人口腔黏膜中基因组DNA的提取 261
4.11.2 核酸的琼脂糖凝胶电泳 262
4.11.3 聚合酶链式反应（PCR） 264
4.11.4 限制性内切酶反应及核酸的琼脂糖凝胶电泳 266
4.12 血流动力学实验方法与技术 268
4.12.1 麻醉犬左心室功能的测定 268
4.12.2 麻醉家兔、大鼠右心室内压（RVP）的测定 271
4.12.3 麻醉家兔、大鼠肺动脉压（PAP）的测定 273
4.12.4 麻醉犬心脏、脑血流量的测定 275
4.12.5 清醒大鼠无创血压的测定 276
4.13 电生理学实验方法 276
4.13.1 微电极技术 277
4.13.2 膜片钳技术与豚鼠心室肌钙通道电流的记录 287
4.14 离体器官、组织实验方法 291
4.14.1 概述 291
4.14.2 受体激动药和阻断药亲和力测定 293
4.14.3 离体Langendorff心脏灌流技术及左室功能测定 299
4.15 动物行为学实验方法 307
4.15.1 动物行为学的研究内容和分类 307
4.15.2 学习记忆类 308
4.15.3 焦虑抑郁类 316
4.16 微生物学与免疫学实验方法 319
4.16.1 细菌形态学检查 320
4.16.2 细菌的培养及鉴定 322
4.16.3 呼吸道感染的微生物学检验 331
4.16.4 肠道病原体的分离与鉴定 336
4.16.5 创伤感染的微生物学检验 340
4.16.6 免疫标记技术 345
4.16.7 淋巴细胞增殖实验 349
4.16.8 免疫血清的制备及测定 352
4.16.9 免疫球蛋白纯化技术——盐析法纯化人血清免疫球蛋白 354
第5章 常用实验研究仪器功能及应用 356
5.1 生物信号采集与处理系统 356
5.1.1 基本工作原理 356
5.1.2 主要功能及应用 356
5.2 医学图像采集与分析系统 357
5.2.1 基本工作原理 357
5.2.2 主要功能及应用 357
5.3 全自动血液流变仪 361
5.3.1 基本工作原理 361
5.3.2 主要功能及应用 362
5.4 全自动生化分析仪 362
5.4.1 基本工作原理 363
5.4.2 主要功能及应用 363
5.5 血气分析仪 364
5.5.1 基本工作原理 364
5.5.2 主要功能及应用 364
5.5.3 常用指标及意义 364
5.6 流式细胞仪 365
5.6.1 基本工作原理 366
5.6.2 主要功能及应用 367
5.7 激光共聚焦显微镜 367
5.7.1 基本工作原理 368
5.7.2 主要功能及应用 369
5.8 MALDI-TOF质谱仪 369
5.8.1 基本工作原理 369
5.8.2 主要功能及应用 370
5.9 可见光小动物活体成像 371
5.9.1 基本工作原理 371
5.9.2 主要功能及应用 371
5.10 电磁血流量计 372
5.10.1 基本工作原理 372
5.10.2 主要功能及应用 372