第一章 导言 1
一、生物技术主要概念 1
二、生物技术实验室的安全性 1
三、生物技术实验基本要求 3
四、生物技术常用实验仪器的使用 5
参考文献 12
第二章 植物细胞工程实验技术 13
实验一 培养基的配制、消毒与接种 13
实验二 植物愈伤组织诱导及分化培养 20
实验三 花药培养 25
实验四 细胞悬浮培养 29
实验五 原生质体的游离、培养与融合 32
实验六 植物细胞的生长计量技术 38
实验七 植物快速无性繁殖 41
实验八 细胞大规模培养及人工种子制备 46
实验九 农杆菌介导的植物遗传转化 50
参考文献 53
第三章 微生物工程实验技术 54
实验一 培养基的配制及灭菌 54
实验二 菌种的分离纯化 61
实验三 微生物形态的观察和革兰氏染色法 63
实验四 稀释平板计数法和细菌生长曲线的测定 66
实验五 发酵罐的构造与实罐灭菌 69
实验六 谷氨酸发酵工程系列实验 73
Ⅰ谷氨酸菌种的制备 74
Ⅱ谷氨酸的中糖发酵及控制 76
Ⅲ谷氨酸发酵过程还原糖含量的测定 78
Ⅳ谷氨酸含量的测定与等电点回收 79
实验七 啤酒发酵工程系列实验 80
Ⅰ协定法糖化试验 82
Ⅱ啤酒酵母纯种分离 83
Ⅲ啤酒酵母的计数 84
Ⅳ啤酒酵母的质量检查 86
Ⅴ啤酒酵母的扩大培养 88
Ⅵ麦芽汁的制备 89
Ⅶ糖度的测定 91
Ⅷ啤酒主发酵 93
Ⅸ酸度和 pH值的测定 94
Ⅹ酒精度的测定及原麦芽汁浓度的计算 95
Ⅺ色度的测定 98
Ⅻ苦味质的测定 99
ⅩⅢ啤酒质量品评 100
参考文献 103
第四章 蛋白质、核酸的提取与分离 104
实验一 溶菌酶的提纯与结晶 104
实验二 果实菠萝蛋白酶的活力测定 106
实验三 酪蛋白的分离提取 107
实验四 双缩脲法定量测定酪蛋白的含量 110
实验五 植物基因组DNA提取 111
实验六 质粒DNA的分离提取 113
实验七 植物RNA提取 115
参考文献 117
第五章 层析、色谱及电泳技术 118
实验一 可溶性糖的硅胶G薄层层析 118
实验二 迷迭香挥发油的气相色谱定量分析 121
实验三 反相高效液相色谱法测定饮料中的苯甲酸与山梨酸 123
实验四 DNA琼脂糖凝胶电泳 124
实验五 SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子质量 126
实验六 非同位素银染DNA测序技术 131
实验七 纤维素薄膜电泳分离血清蛋白及永久胶片制作 139
参考文献 143
第六章 聚合酶链反应 144
实验一 常规PCR法扩增目的潮霉素基因片段 144
实验二 PCR法制备潮霉素基因探针 147
实验三 反转录PCR 149
实验四 随机引物PCR 152
参考文献 154
第七章 分子杂交技术 155
实验一 核酸分子杂交技术 156
实验 Western杂交 158
参考文献 161
第八章 基因重组及基因文库构建 162
实验一 DNA酶切、片段回收与重组连接 162
实验二 重组体DNA遗传转化与克隆筛选 165
实验三 真核生物基因组文库的构建 168
实验四 cDNA文库的构建 172
实验五 真菌Hog1及Pbs2基因功能验证 180
参考文献 185
附 录 186
附录一 常用激素的溶解 186
附录二 常用消毒剂的使用和效果 186
附录三 植物组织培养常用的培养基配方 186
附录四 Kao和Minchayluk的KM8P培养基 187
附录五 细胞筛孔径（μm）与目换算表 188
附录六 GUS染色方法 188
附录七 主要溶液（母液）及缓冲液配制 189
附录八 常见市售酸碱的浓度 191
附录九 基因组文库载体的种类和特征 191
附录十 生命科学常用实验仪器名称中英文对照 191
附录十一 几种主要的限制性核酸内切酶及其作用位点 193
附录十二 几种主要的质粒载体的酶切位点及其选择标记 194
附录十三 实验报告参考式样 197
附录十四 有关警告标志图 200