第一章 抗体制备 1
第一节 多克隆抗体的制备及鉴定 1
一、抗原制备 1
二、动物免疫 2
三、抗体纯化及鉴定 3
四、实验举例 6
第二节 单克隆抗体的制备及鉴定 7
一、单克隆抗体制备原理 7
二、免疫方案 7
三、细胞融合 9
四、融合细胞的选择性培养 11
五、单克隆细胞株的筛选与克隆化 11
六、单克隆抗体鉴定 13
七、单克隆抗体的大量制备 16
八、单克隆抗体的纯化 16
九、单克隆抗体制备的影响因素 19
第二章 非放射性免疫标记技术 21
第一节 酶免疫测定 21
一、实验原理 21
二、试剂与材料 22
三、实验流程 22
四、问题及解决策略 23
第二节 免疫荧光 23
第三节 免疫胶体金 24
一、实验原理 24
二、胶体金标记技术在免疫学中的应用 24
三、应用举例 25
第四节 化学发光 26
一、化学发光原理 26
二、化学发光免疫分析类型 27
三、应用举例 28
第三章 放射性标记技术 30
第一节 放射性同位素标记抗原 30
一、氯胺T标记法 30
二、Iodogen标记法 30
三、125I标记抗原的分离 31
第二节 放射免疫分析技术 31
一、实验原理 31
二、主要技术条件 32
第三节 免疫放射分析 32
第四节 免疫细胞受体放射分析 33
第五节 应用举例 34
第四章 免疫细胞化学技术 37
第一节 免疫细胞化学基本原理 37
一、免疫细胞化学技术基本流程 37
二、抗体的选择 39
第二节 实验操作和常见问题 41
一、细胞样本的制备 41
二、固定 42
三、免疫染色及检测 43
第三节 免疫细胞化学的衍生技术 45
第四节 应用举例 46
第五章 T细胞表位的预测与鉴定 49
第一节 细胞毒性T细胞表位的鉴定 49
一、抗原特异性细胞毒性T细胞的获得 49
二、抗原多肽片段的获得 49
三、多肽亲和力测定 50
四、效应性细胞毒性T细胞的体外诱导 51
五、细胞毒性T细胞活性检测 52
第二节 Th细胞表位的鉴定 53
一、抗原特异性CD4+T细胞克隆的建立 54
二、抗原多肽片段的获得 54
三、肽结合实验 54
四、肽特异性CD4+T细胞的诱导 55
五、细胞增殖实验 55
六、MHC限制性确定 55
七、IFN-γ细胞因子分析 55
第三节 MHC分型 56
一、血清学方法 56
二、聚合酶链反应-序列特异性引物法 56
第四节 应用举例 56
第六章 免疫印迹 60
第一节 免疫印迹基本原理 60
一、蛋白印迹 60
二、DNA印迹 60
三、RNA印迹 61
第二节 蛋白质印迹实验流程 61
一、蛋白质电泳分离 61
二、蛋白质印迹 63
三、免疫检测目的蛋白 65
第三节 核酸印迹的免疫检测 66
一、DNA印迹 66
二、RNA印迹 68
第四节 免疫印迹技术的应用 68
第五节 应用举例 69
第七章 免疫沉淀技术 71
第一节 免疫沉淀与免疫共沉淀 71
一、实验材料 72
二、实验方法 72
三、技术关键 73
第二节 沉降技术 75
一、实验方法 75
二、技术关键 75
第三节 串联亲和纯化技术 76
一、实验材料 76
二、实验方法 77
三、技术关键 78
第四节 DNA沉淀 78
一、实验材料 78
二、实验方法 79
三、技术关键 80
第五节 RNA结合蛋白免疫共沉淀 80
一、实验试剂 80
二、实验方法 80
第八章 常用免疫细胞分离 83
第一节 外周血单个核细胞的分离 83
一、材料和仪器 83
二、实验流程 83
三、问题与解决策略 84
第二节 T、B淋巴细胞及其亚群分离 84
一、尼龙棉柱法富集T淋巴细胞 84
二、补体介导细胞毒剔除B细胞及辅佐细胞富集T细胞 85
三、通过补体细胞毒剔除T淋巴细胞或其亚群 86
第三节 中性粒细胞分离 86
一、材料和仪器 86
二、实验流程 86
第四节 小鼠骨髓造血干细胞及基质干细胞分离 86
一、材料和仪器 87
二、实验流程 87
三、问题与解决策略 87
第五节 免疫磁珠分选免疫细胞及其亚群 87
一、材料和仪器 88
二、实验流程 88
三、问题与解决策略 88
第九章 树突状细胞功能研究 90
第一节 树突状细胞分离纯化 90
一、小鼠脾脏树突状细胞的分离 90
二、人外周血树突状细胞的分离 91
第二节 树突状细胞的培养 93
一、小鼠骨髓前体细胞培养树突状细胞 93
二、人树突状细胞的培养 93
第三节 树突状细胞表型和功能检测 95
一、表型检测 95
二、吞噬功能检测 95
三、一氧化氮分泌能力检测 96
四、细胞因子产生能力检测 96
五、抗原提呈功能检测 97
六、混合淋巴细胞反应 97
第十章 T细胞亚群的诱导分化 99
第一节 Th1和Th2细胞的分化诱导 99
第二节 Th17细胞的诱导分化 100
第三节 调节性T细胞的诱导分化 101
第四节 滤泡辅助性T细胞的诱导分化 102
第十一章 B淋巴细胞分离及功能检测 104
第一节 B淋巴细胞的分离 104
一、尼龙棉柱法分离B淋巴细胞 104
二、T细胞清除法分离B淋巴细胞 104
三、免疫磁珠法分离B淋巴细胞 104
四、流式细胞术分选B淋巴细胞 105
第二节 B细胞表型及初始和记忆性B细胞的检测 105
一、B细胞的表型特征 105
二、初始和记忆性B细胞的表型特征 106
三、B细胞表型检测 106
第三节 B细胞功能亚群的鉴定 107
第四节 B淋巴细胞迁移的检测 108
第五节 B淋巴细胞功能的检测 108
一、B细胞的活化 108
二、B细胞增殖的检测 108
三、免疫球蛋白类别转换的诱导和检测 109
第十二章 自然杀伤细胞功能检测 111
第一节 自然杀伤细胞的分离纯化 111
一、不连续密度梯度分离人外周血NK细胞 111
二、补体裂解法分离小鼠脾脏NK细胞 112
三、磁性细胞分选器分离 112
第二节 自然杀伤细胞活性测定 114
一、效应细胞的制备 114
二、靶细胞的制备 114
三、效-靶细胞作用及检测方法 115
第三节 小鼠体内自然杀伤细胞清除 119
第十三章 巨噬细胞功能检测 121
一、小鼠腹腔巨噬细胞分离及纯化 121
二、人血源性单核巨噬细胞的诱导及分离 122
三、小鼠巨噬细胞极化的诱导及鉴定 123
四、吞噬功能测定 124
五、趋化功能测定 125
六、体内活化巨噬细胞 125
第十四章 母胎界面细胞分离培养 127
第一节 人蜕膜免疫细胞的分离及纯化 127
一、实验原理 127
二、实验试剂与材料 127
三、实验方法 128
四、关键问题和解决策略 129
第二节 人蜕膜基质细胞分离及培养 129
一、实验原理 129
二、实验试剂与材料 129
三、实验方法 130
四、关键问题和解决策略 130
第三节 人绒毛外滋养细胞分离与培养 130
一、实验原理 130
二、实验试剂与材料 130
三、实验方法 131
四、关键问题和解决策略 131
第十五章 流式细胞术 132
第一节 流式细胞仪的原理 132
一、流动室和液流驱动系统 132
二、激光光源及光学系统 132
三、检测信号的存储和放大系统 133
四、检测结果的分析系统 133
五、细胞分选系统 134
第二节 流式细胞术的应用 136
一、免疫细胞的表型分析 136
二、免疫细胞的分选 136
三、细胞内细胞因子的检测 136
四、可溶性分子的检测 136
五、细胞增殖检测 137
六、其他应用 138
第三节 应用实例 139
一、小鼠胸腺细胞表面CD4及CD8分子检测 139
二、小鼠脾脏淋巴细胞胞内IFN-γ检测 140
三、CFSE标记法检测淋巴细胞增殖 141
第十六章 免疫细胞增殖实验 143
第一节 细胞培养与冻存 143
一、细胞传代培养 143
二、冻存与复苏 143
第二节 细胞增殖检测 144
一、直接计数法 144
二、BrdU检测法 145
三、荧光染料CFSE染色法检测细胞增殖 146
四、3H-TdR掺入法 146
五、噻唑蓝比色法 146
第三节 T、B淋巴细胞增殖实验 147
一、T淋巴细胞增殖实验 147
二、B淋巴细胞增殖实验 147
第四节 免疫相关细胞的增殖实验 148
一、细胞因子依赖的细胞株增殖 148
二、混合淋巴细胞培养 148
三、细胞因子依赖的其他免疫细胞增殖 148
第五节 三维细胞培养技术 149
第六节 应用举例 150
一、植物血凝素诱导T淋巴细胞增殖 150
二、混合淋巴细胞培养 150
第十七章 细胞毒实验技术 152
第一节 补体依赖细胞毒实验 152
第二节 细胞毒性T细胞功能测定 153
一、效应细胞诱导和制备 153
二、靶细胞的制备 154
三、特异性抗原诱导的细胞毒性T细胞功能测定 154
第三节 应用举例 157
一、LDH法检测人外周血CTL细胞杀伤活性 157
二、51Cr释放法检测人抗原特异性细胞毒性T细胞功能 157
第十八章 免疫细胞吞噬功能测定 159
第一节 单核巨噬细胞吞噬功能测定 159
一、吞噬实验类型 159
二、巨噬细胞的制备 160
三、吞噬微粒的选择 160
四、吞噬效率的测定 161
第二节 中性粒细胞吞噬功能测定 163
一、中性粒细胞的制备 163
二、吞噬效率的测定 163
第三节 应用举例 163
一、巨噬细胞体内吞噬鸡红细胞实验 163
二、中性粒细胞吞噬功能检测 164
第十九章 免疫细胞凋亡 166
第一节 细胞凋亡的形态学检测方法 166
一、凋亡细胞直接观察 166
二、苏木精-伊红染色法 167
三、Hoechst 33258染色法 168
第二节 细胞凋亡的生物化学研究方法 169
一、凋亡细胞的DNA断裂检测 169
二、免疫印迹检测凋亡信号转导分子 170
第三节 流式细胞术检测细胞凋亡 171
一、亚二倍体分析法 171
二、Annexin V/PI双染法 172
三、线粒体膜电位检测 173
四、TUNEL法 175
第二十章 细胞因子检测 178
第一节 检测方法概述 178
一、生物活性检测法 178
二、免疫学检测法 178
三、分子生物学检测法 179
第二节 常见细胞因子生物学活性检测 179
一、白细胞介素1生物学活性检测 179
二、白细胞介素2生物学活性检测 180
三、白细胞介素10生物学活性检测 181
四、白细胞介素17生物学活性检测 181
五、肿瘤坏死因子生物学活性检测 182
第三节 细胞内细胞因子检测法 182
第四节 可溶性细胞因子的蛋白定量检测 184
一、酶联免疫吸附实验 184
二、微量样本多指标流式蛋白定量技术 184
三、Luminex-液相芯片分析系统 185
第五节 ELISPOT技术 186
第二十一章 光学成像技术在免疫学的应用 189
第一节 活细胞成像技术 189
一、荧光标记和检测 189
二、图像数据采集和分析 190
三、活细胞成像技术应用实例 191
第二节 动物活体成像技术 192
一、动物活体光学成像技术的原理 192
二、动物活体光学成像系统的构成 194
三、动物活体成像的操作流程 194
四、动物活体成像在免疫学中的应用实例 195
第二十二章 免疫相关动物模型建立 198
一、炎症性肠道疾病动物模型 198
二、I型超敏反应动物模型 199
三、多发性硬化症动物模型 200
四、类风湿关节炎动物模型 202
第二十三章 经典免疫学实验 204
第一节 凝集反应 204
一、直接凝集反应 204
二、间接凝集实验 204
三、应用举例 205
第二节 沉淀反应 205
一、液体内沉淀反应 205
二、凝胶内沉淀反应 206
三、应用举例 207
第三节 补体测定 208
一、补体总活性测定 208
二、脂质体均相免疫溶破实验 210
三、补体旁路途径溶血活性的测定 210
四、单个补体成分的测定 211
第四节 循环免疫复合物的测定 211
一、抗原特异性检测方法 211
二、抗原非特异性检测方法 211
第五节 B细胞溶血空斑实验 213
一、琼脂溶血空斑法 213
二、液相单层溶血空斑法 214
附录：常用试剂配制及应用 216
一、常用缓冲液、试剂的配制 216
二、酶免疫检测常用试剂配制 218
三、细胞相关试剂配制 219
四、染色液配制 220
五、固定剂 221
六、蛋白电泳相关试剂 221
七、淋巴细胞分离液 222
八、其他试剂 222