第一章 绪论 1
第一节 概论 1
一、标准物质概念更为包容 1
二、新类型标准物质不断出现 1
三、标准物质评定技术不断发展并面临新挑战 2
四、规范化研制标准物质形成趋势 2
五、高等级标准物质的发展受到重视 2
六、标准物质国际合作日益广泛 3
第二节 分子水平标准物质研制历史和现状 3
一、分子水平标准物质的研制历史 3
二、分子水平生物标准物质的研制现状 7
第三节 分子水平标准物质的种类及其应用 8
一、生物成分量标准物质 8
二、生物活性量标准物质 9
三、生物结构量标准物质 9
第四节 研制动物检疫分子水平标准物质的重要性和必要性 9
一、我国动物检疫诊断试剂现状 10
二、我国动物传染病体外诊断试剂质量评价标准物质的研制及审批管理 10
三、动物检疫分子水平标准物质的研制意义 11
第二章 生物计量学在动物检疫分子水平标准物质研制中的应用 13
第一节 生物计量学概述 13
一、生物计量概述与起源 13
二、生物计量特点 14
三、生物计量的任务 15
第二节 生物计量基标准 15
一、基本定义 15
二、标准物质的分类与分级 16
三、标准物质的特点 18
四、标准物质的基本要求 18
五、标准物质的溯源性 19
第三节 分子水平生物标准物质的研制 19
一、候选物质的选择 19
二、生物标准物质的制备 19
三、均匀性检验 20
四、稳定性考察 21
五、生物标准物质的定值 23
第四节 生物标准物质的研制实例 25
一、血细胞计数国家标准物质的研制 25
二、核苷酸纯度标准物质研制 30
参考文献 36
第三章 动物检疫DNA标准样品的研制 37
第一节 概论 37
第二节 动物检疫基因组DNA标准样品的研制方案简介 37
一、国内外研究现状 37
二、制备基因组DNA标准样品的操作步骤 38
三、均匀性检验 39
四、稳定性检验 40
五、定值 42
六、计量溯源性 43
第三节 霍乱弧菌hlyA基因、rfb-O1基因、rfb-O139基因和ctxAB基因标准质粒库的研制实例 44
一、概述 44
二、材料与方法 44
三、试验结果 47
四、实验室间定性验证 56
五、讨论 57
第四节 霍乱弧菌hlyA基因、rfb-O1基因、rfb-O139基因和ctxAB基因标准样品的制备实例 58
一、样品制备 58
二、均匀性检验 58
三、稳定性检验 62
第五节 沙门氏菌invA基因质粒标准样品的研制实例 65
一、材料 65
二、试验方法 66
三、结果与讨论 68
第六节 白斑综合症病毒核酸标准物质的制备实例 72
一、材料与仪器 73
二、试验方法 74
三、试验结果 77
四、讨论 80
参考文献 80
第四章 动物检疫RNA核酸基因片段标准样品的研制 83
第一节 概论 83
第二节 病毒全RNA标准样品的研制方案简介 83
一、病毒的分离与纯化 83
二、病毒的增殖 86
三、病毒的特性 86
四、一级结构的获得 87
五、均匀性 88
六、稳定性检验 89
七、标准样品的定值 90
八、标准样品的包装与贮存 90
第三节 RNA功能基因片段标准样品的研制方案简介 91
一、病毒RNA功能基因片段质粒的获取 91
二、体外转录 92
三、稳定性基质的研究 92
四、均匀性 92
五、稳定性 92
六、定值 92
第四节 H5亚型禽流感病毒HA基因片段标准样品的研制实例 92
一、H5亚型禽流感病毒命名 92
二、选择目标片段及克隆载体 92
三、H5亚型禽流感病毒目标分子片段的扩增、克隆与测序 93
四、体外转录 96
五、定性检定 96
六、均匀性和稳定性检验 97
七、定值方法 97
第五节 H9N2亚型禽流感病毒全RNA标准样品研制实例 97
一、病毒初步鉴定 97
二、病毒的增殖与纯化 98
三、本研究病毒株的命名 98
四、病毒株各基因引物对的设计 98
五、病毒株的荧光RT-PCR鉴定 98
六、全基因的RT-PCR扩增、测序及分析 99
七、均匀性 104
八、稳定性 104
九、定值 104
第六节 A型禽流感病毒通用型核酸检测标准样品的研制及不确定度分析 105
一、材料 105
二、试验方法 105
三、试验结果 107
四、讨论 111
第七节 新城疫病毒中强毒株核酸检测用标准样品的研制及不确定度分析 112
一、材料 112
二、试验方法 113
三、试验结果 115
四、讨论 119
第八节 口蹄疫病毒核酸检测标准样品的研制 120
一、材料 120
二、试验方法 121
三、试验结果 122
四、讨论 126
参考文献 127
第五章 动物检疫假病毒标准物质的研制 131
第一节 概论 131
一、裸露核酸 131
二、病毒颗粒 132
三、内含特定核酸片段的病毒样颗粒 132
第二节 RNA功能基因片段假病毒标准样品的研制方案简介 134
一、病毒RNA功能基因片段质粒的获取 134
二、病毒RNA功能基因片段质粒的增殖 134
三、真核表达载体及假病毒载体的选择 134
四、稳定性基质的研究 134
五、均匀性 135
六、稳定性 135
七、定值 135
第三节 含马动脉炎病毒N基因序列的病毒样颗粒的制备 135
一、材料 135
二、试验方法 136
三、试验结果 143
四、讨论 147
第四节 含非洲马瘟病毒核酸序列的病毒样颗粒的研制报告 148
一、材料 148
二、试验方法 148
三、试验结果 152
四、结论和讨论 153
第五节 鲤春病毒假病毒标准物质的制备 154
一、材料 155
二、试验方法 155
三、试验结果 159
四、讨论 162
第六节 H9亚型流感病毒HA基因假病毒标准样品实例 162
一、引物设计 162
二、病毒基因组RNA的提取 162
三、HA基因的RT-PCR扩增 162
四、HA基因的克隆 163
五、感受态细胞的制备（氯化钙法） 163
六、连接产物及质粒的转化 164
七、质粒的提取 164
八、序列测定 164
九、转移载体的构建 164
十、假病毒的包装 164
十一、均匀性 164
十二、稳定性 165
十三、定值方法 165
参考文献 165
第六章 动物检疫蛋白质标准样品的研制 168
第一节 概论 168
第二节 蛋白质含量标准物质的研制 168
一、蛋白质计量的重要性和迫切性 169
二、国际蛋白质含量标准物质研制现状及趋势 169
三、我国在蛋白质计量方面存在的主要问题 170
四、我国蛋白质含量标准物质研制情况 170
第三节 动物检疫蛋白质标准样品的研制及实例 171
一、蛋白质标准样品中的冻干保护剂 171
二、蛋白质标准样品的冻干保护机制 173
三、蛋白质冻干保护剂的选择 174
四、动物检疫蛋白质标准样品研制实例——牛布鲁氏菌病阳性血清标准样品 175
参考文献 175
第七章 动物检疫分子水平标准样品质量控制 179
第一节 概述 179
第二节 动物检疫分子水平标准样品研制过程中的质量控制 180
一、动物检疫分子水平标准样品研制过程质量控制 180
二、动物检疫分子水平标准样品生产复制过程质量控制 189
三、动物检疫分子水平标准样品的保存 191
四、动物检疫分子水平标准样品分发及运输 192
五、动物检疫分子水平标准样品技术咨询服务 193
第三节 动物检疫分子水平标准样品使用过程中的质量控制 193
一、标准样品证书 193
二、标准样品开封后保存 194
第四节 动物检疫分子水平标准样品的外部质量评价 194
一、标准样品质量管理体系的外部评审 194
二、针对标准样品检测方法的外部质量控制 195
三、针对标准样品研制项目的外部评审 195
四、标准样品评价 195
参考文献 197
第八章 动物检疫分子水平有证标准样品的认定和管理 198
第一节 我国标准物质的认定及管理模式 198
一、标准物质管理规章 198
二、标准物质的分类和分级 199
三、标准物质的定级评审 200
第二节 标准样品的认定流程 201
一、标准物质申报的技术文件和样品的要求 201
二、标准物质制造计量器具许可证申请书的填写 202
三、标准物质研制报告的编写要求 202
四、标准物质定级评审的依据 202
五、标准物质定级评审程序 203
六、标准物质证书编写要求 204