基本实验 3
第一部分 流感病毒的扩增及其效价测定 3
实验一 鸡胚的接种与收获 3
实验二 血细胞凝集试验测定流感病毒效价 9
第二部分 血凝素基因的克隆 17
实验三 流感病毒基因组RNA的提取 17
实验四 血凝素基因的扩增 19
实验五 血凝素基因的回收纯化 24
实验六 血凝素基因的连接 29
实验七 感受态细胞的制备及转化 31
第三部分 血凝素基因重组克隆鉴定 35
实验八 流感病毒中血凝素基因的鉴定之一：质粒DNA的提取 35
实验九 流感病毒中血凝素基因的鉴定之二：测序 37
第四部分 血凝素基因的原核表达以及蛋白质纯化 49
实验十 血凝素基因的酶切及回收纯化 49
实验十一 血凝素基因的原核表达系统的构建 52
实验十二 血凝素基因的原核表达 53
第五部分 血凝素基因重组腺病毒的构建与筛选 59
实验十三 血凝素基因的酶切及回收纯化 59
实验十四 重组病毒的构建 61
实验十五 重组病毒的筛选 63
第六部分 重组表达HA抗原的鉴定 66
实验十六 SDS-PAGE电泳 66
开放实验 75
第七部分 重组病毒表达HA抗原的免疫原性鉴定 75
实验十七 动物免疫 75
实验十八 ELISA检测 77
实验十九 蛋白质印迹实验 80
第八部分 重组病毒的保存 86
实验二十 菌种保藏 86
第九部分 重组病毒的定点突变研究 92
实验二十一 蛋白质的定点诱变 92
实验二十二 蛋白质N末端的测定 95
补充实验 101
实验二十三 血细胞凝集抑制试验 101
实验二十四 传代细胞培养 103
实验二十五 病毒TCID50测定 106
实验二十六 鸡胚原代细胞的培养 110
实验二十七 细胞的冻存与复苏 115
实验二十八 单抗的制备 117
附录 127
一、有关培养基及缓冲液配法 127
二、实验报告 129
三、玻璃仪器的清洗 131
四、安全规则 132
五、美国疾病控制中心实验室生物安全级别标准 133