第一章 绪论 1
第二章 糖的分离和分析 8
一、糖的定量测定 8
（一）中性糖的测定 12
1．还原糖的次亚碘酸盐定量法 12
2．3，5-二硝基水杨酸（DNS）比色法 13
3．Somogyi-Nelson法 14
4．苯酚-硫酸法 16
5．蒽酮-硫酸法 17
6．地衣酚-硫酸法 18
7．戊糖的测定（地衣酚法） 19
8．己糖和6-脱氧己糖的比色测定 20
9．葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖 21
（二）氨基己糖的测定 23
1．氨基己糖的比色测定 23
2．N-乙酰氨基己糖的比色测定 25
3．用Ehrlich试剂测定氨基糖 26
（三）己糖醛酸的测定 30
1．己糖醛酸的比色测定 30
二．糖的色谱法 31
（一）糖的纸色谱 31
1．单糖和双糖的纸色谱 31
2．寡糖和多糖的纸色谱 39
3．多羟基醇的纸色谱 40
4．糖酸的纸色谱 41
5．氨基糖的纸色谱 42
6．糖内酯的纸色谱 42
7．糖磷酸酯的纸色谱 43
（二）糖的柱色谱 46
1．糖的活性炭柱分离 46
2．蜂蜜中寡糖的炭柱分级法 48
3．糖的离子色谱法分析 49
（三）糖的气相色谱 57
1．糖的三甲基硅醚衍生物 58
2．糖腈乙酸酯衍生物 60
3．糖醇乙酸酯衍生物 63
4．糖的三氟乙酸酯衍生物 65
5．果糖和葡萄糖或甘露糖共存时的气相色谱定量法 67
6．气相色谱同时测定醛糖与糖醛酸 69
7．气相色谱用于微量多糖与寡糖成分分析 71
（四）糖的高效液相色谱 74
1．单糖和双糖的分析 76
2．寡糖的分离和测定 83
3．糖肟全苯甲酸酯紫外标记法分离和测定微量单糖和双糖 89
4．脉冲安培检测法（HPAEC-PAD）用于单糖和寡糖的分析 90
5．神经节苷脂的高效液相色谱分析（HPLC） 100
（五）糖的薄层色谱 102
三、糖的电泳法 105
1．红细胞膜上唾液酸的等速电泳 106
2．多糖的滤纸电泳 108
3．多糖的玻璃纤维纸电泳 110
4．多糖的醋酸纤维薄膜电泳 111
5．多糖的凝胶电脉 112
6．单糖的高效毛细管电泳 113
7．糖蛋白的高效毛细管电泳 116
8．酸性多糖与寡糖的等电聚焦和聚丙烯酰胺凝胶电泳 120
四、糖复合物中其它成分的测定 122
1．糖复合物中乙酰基的测定 122
2．糖复合物中硫酸基的测定 124
第三章 复合糖化物的物化性质 126
一、多糖的纯度鉴定 128
1．比旋度法 128
2．超离心法 129
3．高压电泳法 129
4．凝胶过滤法 131
二、复合糖化物分子量的测定 133
1．测定多糖分子量的方法原则 133
2．渗透压法测定多糖分子量 138
3．蒸气压法测定多糖分子量 141
4．端基法测定多糖分子量 143
5．光散射法测定多糖分子量 148
6．粘度法测定多糖分子量 155
7．高效液相色谱法测定多糖分子量（1） 158
8．高效液相色谱法测定多糖分子量（2） 166
9．超过滤法及其在多糖化学研究中的应用 170
10．凝胶过滤法测定糖蛋白与糖肽的分子量 180
第四章 糖链结构分析方法 183
一、从糖蛋白分离糖链或糖肽 184
1．O-糖苷键的稀碱水解（β-消除反应） 184
2．N-糖苷键的肼解法 186
3．N-糖苷键的三氟乙酸水解法 189
4．多糖的部分酸水解 191
5．糖蛋白与糖肽的部分酸水解 194
6．从卵清蛋白制备糖肽 196
7．酶解法从糖蛋白释放糖链 199
二、用于结构研究的化学方法 202
1．高碘酸氧化 202
2．Smith降解 204
3．甲基化反应（改良Hakomori法） 206
4．甲基化反应（硫酸二甲酯法） 209
5．多糖中乙酰基的定位 211
三、糖苷酶在结构分析中的应用和其它 213
1．肼解法释放牛凝血酶原寡糖的顺序测定 224
2．β-N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶-H（Endo-H）的分离纯化 225
3．β-甘露糖苷酶的分离纯化 229
4．一种能分解琥珀酸型聚糖的内切酶的分离纯化 231
5．从土壤细菌中初步分离α-甘露糖苷酶和α（1→6）甘露聚糖内切酶 233
6．枯草杆菌α-淀粉酶的分离纯化 237
7．红色红曲霉α-葡萄糖苷酶的分离纯化 240
8．茁霉多糖酶的分离纯化 244
9．多聚半乳糖醛酸内切酶的分离纯化 247
10．几丁质酶的分离纯化 249
11．菊糖酶的分离纯化 252
12．真菌纤维素酶系的分离纯化 255
13．木聚糖酶系的分离纯化 259
14．糖苷酶的固定化 261
15．硝基苯酚糖苷化合物的有机合成 262
四、用于糖链结构分析的仪器分析方法 271
1．糖的红外光谱法 271
2．糖的拉曼光谱法 279
3．糖的质谱法 284
4．全乙酰化低聚木糖的质谱研究 287
5．全苄基化缩水内醚糖的质谱研究 292
6．色质联用进行低聚糖的结构序列分析 303
7．质谱法测定痕量的完整寡糖 307
8．神经节苷脂的快原子质谱结构分析 318
9．1H和13C核磁共振光谱在多糖上的应用 324
五、糖链结构研究中的免疫学方法 340
1．抗原的制备 340
2．抗血清的制备 346
3．抗血清的处理和纯化 347
4．效价的测定和糖结构分析 348
第五章 糖复合物的其它研究方法 355
一、同位素标记在糖复合物微量分析中的应用 355
二、拟糖蛋白（Neoglycoproteins）的合成和应用 358
（一）糖与蛋白质形成共价联接的方法 361
1．重氮盐偶合法 361
2．重氮偶联法 363
3．异硫腈酸酯法 364
4．异硫氰酸苯基-α-L-岩藻糖苷和BSA的偶联 366
5．还原胺化法合成拟糖蛋白 368
6．寡糖天冬酰胺经茚三酮激活后用还原胺化法和蛋白质偶联 370
7．还原胺化法偶联糖蛋白和蛋白质 372
8．还原氨基化方法 374
9．活化酰基化方法 375
10．糖肽与蛋白质的偶联 376
11．双功能试剂交联法合成拟糖蛋白（1） 379
12．双功能试剂交联法合成拟糖蛋白（2） 380
13．脒化法合成拟糖蛋白 380
（二）水不溶性糖类载体和蛋白质的偶联——以糖类成分为基质的蛋白质和酶的固定化 386
1．溴化氰活化法 387
2．重氮法 388
3．用双环氧试剂的交联法 390
（三）拟糖蛋白的应用 391
1．用于糖结合蛋白的分离和鉴定 391
2．作为组织化学的标记物 393
三、多糖的化学修饰 394
（一）非选择性化学修饰 395
1．酯化 395
2．甲基化 400
3．O-羧甲基化，O-羧甲基纤维素钠的制备 402
（二）选择性化学修饰 403
1．伯羟基的酯化 403
2．伯羟基的醚化 405
3．伯羟基的氧化 407
4．仲羟基的氧化 409
5．羧基的还原 410
6．羧基的酰化 411
7．N-酰化 412
（三）末端基团的修饰 413
第六章 多糖 416
一、植物多糖 416
（一）细胞内贮存多糖的提取和分离 418
1．当归水溶性多糖的提取和分离 418
2．亲和层析法分离直链淀粉和支链淀粉 420
（二）果胶类物质的提取和分离 422
1．单子叶植物细胞壁中鼠李-半乳糖醛酸聚糖的分离 422
2．双子叶植物细胞壁中鼠李-半乳糖醛酸聚糖的分离 423
（三）半纤维素的提取和分离 425
1．悬浮培养细胞半纤维素的分离 425
2．新鲜植物组织半纤维素的分离 430
（四）树胶和粘胶多糖 436
1．根部多糖的分离 436
2．茎部多糖的分离 437
3．叶中多糖的分离 438
4．皮部多糖的分离 439
5．花中多糖的分离 441
6．种荚多糖的分离 442
7．培养组织材料中多糖的分离 442
8．大蒜球根部多糖的提取 443
（五）寡糖素 446
1．寡糖素（寡聚半乳糖醛酸）的酶法制备、纯化和活性测定 446
二、微生物多糖 447
1．粪产碱杆菌产粘变株胞外酸性多糖的纯化 448
2．斜顶菌（Clicoplus caespitosus PK）水溶性多糖的分离提纯 449
3．香茹（Lentinus edodes）碱溶性多糖的分离提纯 451
4．酵母甘露聚糖的分离提取 452
5．酵母甘露聚糖的选择性乙酰解反应 455
6．免疫学方法在酵母甘露聚糖结构研究中的应用 457
7．树舌（Ganoderma applanatum）中色素多糖的分离制备 460
三、海藻多糖 461
（一）褐藻多糖 462
1．褐藻多糖的分析法 463
2．褐藻多糖物理性质的测定 474
3．褐藻胶的分离与提纯 475
4．褐藻糖胶的分离与提纯 476
5．褐藻淀粉（海带淀粉）的分离与提纯 477
（二）红藻多糖 478
1．红藻多糖的分析方法 480
2．红藻多糖物理性质的测定 488
3．琼胶的分离与提纯 493
4．琼脂糖的分离与制备 495
5．珠状琼脂糖的制备和提纯 497
6．卡拉胶的分离与提纯 498
第七章 糖蛋白 500
一、动物来源糖蛋白 500
1．粘液糖蛋白的分离 500
2．膜糖蛋白的分离 503
3．纤维粘连蛋白的测定方法 507
二、植物来源糖蛋白 510
1．中药知母（Anemarrhena asphodeloides）糖蛋白的提取与分离 511
2．胡萝卜（Daucus carota L．）根细胞壁伸展蛋白的提取与分离 513
3．萝卜（Raphanus sativus L．Var．hortensis backer）叶糖蛋白的提取与分离 514
4．葡萄（Carignan noir CV）渣中糖蛋白的提取与分离 514
第八章 蛋白聚糖 516
一、糖胺聚糖（GAG）的分离提取 526
1．糖胺聚糖的一般提取方法 526
2．组织中糖胺聚糖的提取 528
3．透明质酸的分离提取 529
4．4-硫酸软骨素的分离提取 531
5．6-硫酸软骨素的分离提取 533
6．软骨素的制备 534
7．硫酸皮肤素的分离提取 536
8．肝素的分离提取 538
9．低分子肝素的制备 540
10．硫酸乙酰肝素（硫酸类肝类）的分离提纯 542
11．硫酸角质素的分离提取 545
12．海参糖胺聚糖的分离提取 547
二、糖胺聚糖（GAG）的分析和测定 549
（一）糖胺聚糖的电泳法鉴定 551
1．糖胺聚糖乙酸纤维素膜双向电泳 552
2．糖胺聚糖乙酸纤维素膜单向电泳 553
3．糖胺聚糖的琼脂糖凝胶电泳 554
4．糖胺聚糖不连续琼脂糖凝胶电泳 556
5．糖胺聚糖聚丙烯酰胺凝胶电泳 558
（二）糖胺聚糖的酶学与化学法组成鉴定 560
1．糖胺聚糖的酶降解 560
2．糖胺聚糖中氨基己糖的鉴别测定 564
3．糖胺聚糖中己糖醛酸的鉴别测定 565
4．糖胺聚糖中硫酸基／羧酸基比值测定 567
5．糖胺聚糖中N-乙酰氨基己糖／己糖醛酸的比值测定 570
6．糖胺聚糖中N-硫酸基／总硫酸基的比值测定 571
（三）糖胺聚糖的定量分析 573
1．凝胶过滤法测定糖胺聚糖的分子量 573
2．总糖胺聚糖的含量测定 574
3．混合糖胺聚糖中各聚糖相对含量测定 575
4．糖胺聚糖的比色定量法 576
（四）尿中糖胺多糖的测定方法 577
1．原子吸收法 578
2．单向电泳法 579
（五）糖胺聚糖的酶解 582
三、人主动脉蛋白聚糖（PG）的研究方法 584
（一）蛋白聚糖的提取、分离与鉴定 584
1．蛋白聚糖的解聚提取 584
2．蛋白聚糖的分离 585
3．蛋白聚糖（或糖胺聚糖）的鉴定 589
4．蛋白聚糖中硫酸根位置的分析 592
（二）蛋白聚糖的生物学性质的研究 594
1．蛋白聚糖与外源性透明质酸（HA）的再聚集作用 594
2．蛋白聚糖与脂蛋白（LP）的相互作用 595
四、培养的动物细胞中蛋白聚糖（PG）的研究方法 598
1．细胞培养与标记蛋白聚糖的提取 599
2．离子交换柱层析分离蛋白聚糖 603
3．凝胶过滤柱层析分离蛋白聚糖 604
4．氯化铯等密度超速离心法分离蛋白聚糖 605
5．糖胺聚糖和寡糖的分离鉴定及蛋白聚糖的结构分析 606
五、各种来源蛋白聚糖的提取和分离 612
1．软骨蛋白聚糖的提取和分离 612
2．脑组织硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的提取与分离 614
3．角膜硫酸角质素蛋白聚糖的提取和分离 618
4．蛋白聚糖的部分酸水解 621
5．蛋白聚糖的非特异性蛋白酶消化 622
6．蛋白聚糖的特异性蛋白酶消化 622
第九章 神经鞘糖脂 624
一、神经节苷脂的的分离和纯化 631
（一）分配分离法 631
1．Suzuki改良Folch分配法 631
2．Ladisch分配法 633
（二）离子交换法 636
二、神经节苷脂的鉴定 639
（一）神经节苷脂的定量——唾液酸含量的测定 639
1．间苯二酚-盐酸法 639
2．过碘酸-间苯二酚法 640
3．硫代巴比妥酸法 641
（二）薄板层析（TLC）法 642
（三）高效薄板层析（HPTLC）板放射免疫分析法 643
三、中性糖脂的分离和纯化 645
四、鞘糖脂抗体的制备和鉴定 647
第十章 凝集素 651
一．凝集素的分离、纯化和鉴定 659
（一）天然的或修饰的聚糖作亲和吸附剂 659
1．伴刀豆凝集素（ConA）的纯化 662
2．蓖麻凝集（RCA1）的纯化 663
3．麦胚凝集素（WGA）的纯化 665
4．花生凝集素（PNA）的纯化 666
（二）结合载体的糖蛋白或糖肽作亲和吸附剂 668
1．植物血凝素（PHA）的纯化 675
2．麦胚凝集素（WGA）的纯化 672
（三）结合载体的单糖或双糖作亲和吸附剂 673
1．大豆凝集素（SBA）的纯化 677
2．蓖麻蚕血淋巴凝集素（PLL1）的纯化 679
3．花生凝集素（PNA）的纯化 680
（四）细胞膜凝集素的纯化 681
（五）凝集素的疏水层析 683
（六）鉴定凝集素的一般方法 685
1．血凝活力的鉴定 685
2．凝集素糖结合活性的定量测定方法 686
3．纯度鉴定 688
4．糖蛋白鉴定 689
（七）附注 692
1．Sepharose的酸处理 692
2．甲状腺球蛋白-Sepharose的制备 692
3．卵粘蛋白-Sephsrose的制备 693
4．半乳糖胺-CH-Sepharose的制备 694
5．GalNAc-Epoxy-Sepharose的制备 694
6．Rha-Sepharose4B的制备 695
7．乳糖-淀粉凝胶亲和吸附剂的制备 695
8．固定化红血球 696
9．麦芽糖-淀粉凝胶的制备 697
二、凝集素衍生物的制备 697
（一）标记凝集素的制备 697
1．放射性标记凝集素 697
2．酶标记凝集素 702
3．荧光标记凝集素 707
4．生物素（biotin）标记凝集素 709
5．铁蛋白标记凝集素 710
6．胶体金-凝集素复合物的制备 712
（二）固定化凝集素的制备 713
1．ConA-Sepharose4B的制备 713
2．RCA-Sepharose4B的制备（带己二胺“臂”） 714
3．ConA-Sepharose6B的制备（氰基硼氢化钠法） 714
4．溴化氰活化法制备固相化凝集素 716
三、凝集素在生物科学与医学研究中的应用 717
（一）用固定化凝集素分离纯化糖蛋白 718
1．白扁豆β-N-乙酰氨基己糖苷酶的分离纯化 719
2．猪大网膜脂肪细胞膜糖蛋白的分离纯化 720
3．血型物质MN抗原的纯化 723
4．用ConA-Sepharose4B分离ConA亲和蛋白 724
5．固相化凝集素的强化 725
（二）用凝集素检测糖复合物并推测其寡糖结构 727
1．测定溶液中的糖复合物 727
2．测定细胞膜和亚细胞结构上的糖复合物 737
后记 745