1绪论 1
1.1植物基因启动子的研究进展 1
1.1.1启动子的结构和功能 1
1.1.2启动子的分类 1
1.2植物转录因子的研究 2
1.2.1转录因子的结构和分类 2
1.2.2转录因子的活性 4
1.2.3转录因子的功能 4
1.2.4 MYB转录因子的研究进展 6
1.3本研究的目的和意义 8
2白桦BplMYB46基因的表达研究 10
2.1实验材料 10
2.1.1植物材料 10
2.1.2载体与菌株 10
2.1.3主要试剂 10
2.1.4药品及培养基制备 11
2.2实验方法 12
2.2.1 BplMYB46转录因子的亚细胞定位 12
2.2.2白桦BplMYB46基因分析 16
2.2.3白桦BplMYB46基因的表达 16
2.2.4 BplMYB46启动子序列分析 18
2.2.5 BplMYB46启动子的时空表达分析 18
2.3结果与分析 22
2.3.1 BplMYB46转录因子的亚细胞定位 22
2.3.2白桦BplMYB46基因分析 24
2.3.3白桦BplMYB46基因的表达 24
2.3.4 pCAMBIA1301-BplMYB46启动子序列元件分析 27
2.3.5 BplMYB46启动子的时空表达 28
2.4讨论 30
2.5本章小结 31
3白桦BplMYB46基因的功能研究 33
3.1实验材料 33
3.1.1植物材料 33
3.1.2载体与菌株 33
3.1.3试剂 33
3.1.4溶液及培养基制备 34
3.2实验方法 35
3.2.1 BplMYB46基因植物过表达载体的构建和工程菌的制备 35
3.2.2 BplMYB46基因对白桦的遗传转化 40
3.2.3 BplMYB46转基因白桦在非生物胁迫下的抗逆分析 42
3.2.4 BplMYB46基因在白桦次生壁合成中的功能分析 46
3.3结果与分析 48
3.3.1 BplMYB46基因植物表达载体的构建和工程菌的制备 48
3.3.2转基因白桦的筛选与检测 52
3.3.3 BplMYB46转基因白桦苗非生物胁迫下的抗逆分析 54
3.3.4 BplMYB46基因在白桦次生壁合成中的功能分析 65
3.4讨论 69
3.5本章小结 71
4 BplMYB46转录激活结构域和同源蛋白的互作研究 73
4.1实验材料 73
4.1.1菌株与载体 73
4.1.2常用试剂 73
4.1.3药品及培养基制备 73
4.2实验方法 75
4.2.1 BplMYB46转录因子转录激活结构域的研究 75
4.2.2 BplMYB46转录因子与同源基因互作的研究 78
4.3结果与分析 81
4.3.1 BplMYB46转录因子转录激活结构域分析 81
4.3.2 BplMYB46转录因子与同源蛋白的互作 83
4.4讨论 86
4.5本章小结 87
5 BplMYB46识别顺式作用元件的研究 89
5.1实验材料 89
5.1.1菌株与载体 89
5.1.2主要试剂 89
5.1.3药品及培养基制备 90
5.2实验方法 91
5.2.1 BplMYB46识别顺式作用元件的研究 91
5.2.2 BplMYB46与顺式作用元件的互作验证 100
5.2.3染色质免疫共沉淀（ChIP）技术分析BplMYB46与下游基因的互作 106
5.3结果与分析 109
5.3.1 BplMYB46识别顺式作用元件的分析 109
5.3.2 BplMYB46与顺式作用元件互作分析 114
5.3.3 ChIP实验结果分析 117
5.4讨论 118
5.5本章小结 120
6 BplMYB46调控下游基因的表达分析 121
6.1实验材料 121
6.1.1植物材料 121
6.1.2常用试剂 121
6.1.3溶液配制 121
6.2实验方法 121
6.2.1 RNA的提取与反转录 121
6.2.2数字基因表达谱文库的构建和测序 122
6.2.3数据的处理 122
6.2.4测序评估 122
6.2.5基因表达量统计 123
6.2.6差异表达基因筛选 123
6.2.7 RT-PCR方法验证表达谱测序结果 123
6.3结果与分析 125
6.3.1表达谱测序结果评估 125
6.3.2差异表达基因分析 129
6.3.3 RT-PCR验证表达谱结果 131
6.4讨论 132
6.5本章小结 133
7讨论与展望 134
7.1讨论 134
7.2展望 136
参考文献 137