第一部分 基本操作 2
第1章 分子生物学实验室的基本要求 2
第一节 实验室规则 2
第二节 实验室安全 3
第三节 实验室物品与仪器的管理 6
第2章 仪器操作、实验用水与溶液配制 9
第一节 实验仪器操作 9
第二节 实验用水 18
第三节 溶液的配制 21
第3章 大肠杆菌培养的基本操作 28
第一节 培养前准备 28
第二节 大肠杆菌培养及测定方法 34
第三节 大肠杆菌菌株保存 39
第4章 电泳基本操作 41
第一节 基本原理 41
第二节 琼脂糖凝胶电泳 44
第三节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 49
第四节 双向琼脂糖凝胶电泳 53
第5章 生物信息学基本分析方法 57
第一节 核酸信息分析 57
第二节 蛋白质信息分析 69
第二部分 核酸实验 72
第6章 核酸的分离纯化和定量 72
第一节 质粒DNA的提取与纯化 72
第二节 基因组DNA的提取 80
第三节 RNA的提取 87
第四节 核酸的定量 93
第7章 聚合酶链反应技术 96
第一节 PCR实验流程 96
第二节 普通PCR 105
第三节 RT-PCR反应 108
第四节 荧光定量PCR 113
第8章 基因克隆 120
第一节 载体的选择 120
第二节 载体与目的基因的酶切和产物回收 125
第三节 连接反应 134
第四节 基因的转移 138
第五节 阳性重组子的鉴定 145
第9章 核酸分子杂交 150
第一节 核酸探针的制备 150
第二节 斑点杂交 164
第三节 Southern杂交 169
第四节 Northern印迹杂交 177
第五节 基因芯片技术 190
第10章 核酸序列测定 198
第一节 双脱氧测序法 198
第二节 焦磷酸测序法 205
第三部分 蛋白质实验 208
第11章 蛋白质的提取与纯化 208
第一节 蛋白质提取的基本原则 208
第二节 蛋白质的提取 209
第三节 基因工程表达蛋白的纯化 211
第12章 蛋白质的定量检测 214
第一节 Lowry法测定蛋白质含量 214
第二节 BCA法测定蛋白质含量 215
第三节 Bradford法测定蛋白质含量 217
第13章 目标蛋白质的测定 220
第一节 蛋白质SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 220
第二节 蛋白质免疫印迹法 227
附录 238
附录A 溶液配制 238
附录B 常用核酸和蛋白质相对分子质量标准物 248
附录C 常用限制性内切核酸酶数据 249
附录D 核酸蛋白质数据转换 250
参考文献 252