《高级生物化学实验技术》PDF下载

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  • 作  者:高英杰,郝林琳主编
  • 出 版 社:北京:科学出版社
  • 出版年份:2011
  • ISBN:9787030323606
  • 页数:232 页
图书介绍:生物化学既是现代生命科学最重要的基础学科,同时又是现代生物学中发展最快的一门前沿学科。其理论与技术的应用已渗透到生命科学、环境科学、海洋科学等相关学科。随着生物工程上游技术的不断发展,生物工程下游技术尤其是蛋白质的分离、纯化、复性、鉴定等技术的应用越显重要,由于蛋白质的多样性,所以下游技术综合应用的难度要大于上游技术。因此,本书是编者在长期的教学、实验、科研的基础上,尤其在生物技术系历年开设的硕士研究生高级生化实验课和生物技术专业本科生物化学实验技术课程的基础上,经过不断的充实、总结和修改而成。全书共分11大部分,包括30个大实验,以蛋白质和核酸等生物大分子的分离、制备、定性和定量为主要内容。选用的方法主要是科研中经常需要采用的生化技术,如电泳技术、层析技术、分光光度技术、膜分离技术、大分子印迹技术等。既有经典常规的实验方法,又有近年来国内外发展起来或广泛应用的一些新方法、新技术。内容比较全面,方法切实可行,重复性高。本书按实验技术系统编写,便于读者全面、系统地掌握生化实验技术的基本理论和基本操作。在实验的理论阐述上,力求系统、简明、易于理解;操作步骤上做到具体、详尽、可操作性强。其中

第一部分 生物化学样品制备技术 1

第二部分 沉淀技术 8

第三部分 膜分离技术 13

第四部分 色谱技术 22

实验一 分子筛层析 28

血清蛋白质盐析及分子筛层析脱盐 32

实验二 离子交换层析 34

离子交换层析纯化血清蛋白 36

实验三 亲和层析 39

亲和色谱分离GST融合蛋白 41

第五部分 分光光度技术 44

实验四 蛋白质的定量检测 49

蛋白质的直接定量(UV)检测 49

比色法蛋白质定量 50

实验五 氨基酸的定量测定 54

实验六 色氨酸的定量测定 56

实验七 超氧化物歧化酶活力测定(邻苯三酚自氧化法) 59

实验八 核酸含量的测定 61

紫外吸收法测定核酸含量 61

DNA含量测定——改良二苯胺法 62

RNA的测定——苔黑酚法 63

实验九 血液葡萄糖的测定 65

邻甲苯胺法 65

葡萄糖氧化酶法 67

实验十 血清钙的测定 70

邻甲酚酞络合酮法 70

甲基麝香草酚蓝比色法 71

实验十一 血清无机磷的测定 73

硫酸亚铁磷钼蓝比色法 73

紫外光光度法 74

米吐尔直接显色法 75

实验十二 血清甘油三酯(TG)的测定 77

实验十三 血清胆固醇的测定 78

实验十四 血液尿酸的测定 80

实验十五 抗坏血酸(维生素C)的测定 82

实验十六 维生素A的测定 84

第六部分 离心技术 86

实验十七 动物肝脏DNA的提取和鉴定 90

实验十八 质粒DNA的制备 93

实验十九 兔肝RNA的制备及其含量测定 96

实验二十 差速离心法分离大鼠肝脏细胞核和线粒体 101

实验二十一 家兔血清、血浆和无蛋白血滤液的制备 103

血清的分离与制备 103

血浆的分离与制备 104

无蛋白血滤液的制备 104

第七部分 电泳技术 107

实验二十二 不连续聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离血清蛋白质 114

实验二十三 SDS-不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子质量 121

实验二十四 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测定蛋白质的等电点 126

实验二十五 聚丙烯酰胺凝胶浓度梯度电泳测定蛋白质的分子质量 136

实验二十六 琼脂糖凝胶电泳分离血清乳酸脱氢酶同工酶 140

实验二十七 醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质 144

实验二十八 琼脂糖凝胶电泳分离DNA 147

实验二十九 蛋白质双向电泳 150

第八部分 印迹技术 158

实验三十 蛋白质印迹 164

实验三十一 核酸印迹 171

第九部分 酶联免疫吸附测定技术 177

实验三十二 酶联免疫法测定兔血清IgG 185

第十部分 放射免疫测定技术 188

实验三十三 放免法测定血清cAMP 199

第十一部分 蛋白质结构分析技术 203

实验三十四 DNS-Cl法测定蛋白质的N端氨基酸 204

实验三十五 蛋白质C端氨基酸的测定及顺序分析(羧肽酶法) 208

实验三十六 蛋白质及多肽顺序分析(DABITC/PITC双偶合法) 211

附录 215

一、常用缓冲溶液的配制 215

二、易变质及需要特殊方法保存的试剂 226

三、离心机和转数的换算 227

四、硫酸铵饱和度常用表 228

五、某些物质燃烧时应用的灭火剂 229

六、几种常用实验动物的采血量和采血方法 230

七、干燥器内常用的干燥剂 230

八、测定蛋白质浓度的方法 231

九、SDS-PAGE中通常选用的标准蛋白质的分子质量 231

主要参考文献 232