第一章 绪论 3
第一节 CGT酶概述 3
第二节 CGT酶的三维结构 5
第三节 CGT酶的催化机理 7
一、CGT酶与底物结合的分子机制 7
二、CGT酶的转糖基反应机理 9
三、CGT酶的环化机理 12
第二章 环糊精葡萄糖基转移酶的产物特异性改造第一节 CGT酶产物特异性的研究进展 17
第二节 P.macerans α-CGT酶的克隆表达及性质研究 23
一、P.macerans α-CGT酶在大肠杆菌中的克隆表达 24
二、重组P.macerans α-CGT酶的分离纯化 26
三、重组α-CGT酶的性质 30
第三节 定点突变提高CGT酶的α-环糊精特异性 38
一、野生和突变CGT酶的表达与纯化 39
二、定点突变影响CGT酶的环糊精形成活力 40
三、定点突变影响环糊精的生产 43
第四节 定点突变提高CGT酶的β-环糊精特异性 48
一、多重序列比对 48
二、野生和突变CGT酶的表达与纯化 50
三、Lys47对产物特异性的影响 51
第三章 环糊精葡萄糖基转移酶的热稳定性改造第一节 CGT酶高温解折叠研究 61
一、研究方法介绍 62
二、CGT酶的分子动力学模拟 65
第二节 盐桥与CGT酶耐热性的关系研究 83
一、研究方法介绍 84
二、CGT酶热不稳定区分析 87
第四章 环糊精葡萄糖基转移酶的发酵生产第一节 CGT酶的发酵 109
一、种子的培养与保存 109
二、摇瓶水平的工艺优化 113
三、发酵罐水平的工艺优化 131
第二节 CGT酶制剂稳定性 153
第五章 环糊精的制备技术 161
第一节 环糊精含量的分析 161
一、色谱法 161
二、毛细管电泳 163
三、分光光度法 163
四、其他方法 174
第二节 环糊精的制备工艺 174
一、非控制过程 174
二、控制过程 176
第三节 影响环糊精得率的因素 180
一、底物 180
二、反应条件 184
第六章 基于环糊精葡萄糖基转移酶的其他产品制备技术第一节 2-氧-α-D-吡喃葡萄糖基抗坏血酸的制备 195
一、AA-2G的合成方法 196
二、AA-2G转化合成中关键因素的确定 198
三、AA-2G转化条件优化 200
第二节 甜菊糖苷的制备 210
一、CGT酶的筛选 211
二、反应条件对转葡萄糖基反应的影响 213
三、改性后产物的甜味评价 221
第三节 偶合糖的制备 226
一、利用CGT酶生产偶合糖工艺 227
二、偶合糖的精制 228
三、偶合糖的结晶 229
参考文献 232