目录 1
第一篇 组织培养技术 1
第一章 绪论和基本理论知识 1
第一节 绪论 1
一、组织培养发展的回顾 1
二、对组织培养工作者的要求和工作方法 5
三、组织培养概念 6
四、对组织培养的评价 7
第二节 培养细胞生物学 9
一、生存环境和细胞关系 9
二、培养细胞形态学 11
三、细胞黏附 15
四、培养细胞在体外的生长和增殖过程 17
五、培养细胞增殖和分化 22
六、组织培养细胞遗传学特征 36
七、细胞和细胞、细胞和基质的相互关系 38
八、不同细胞生物性状类型 38
九、能量代谢 39
十、细胞附着底物 41
第三节 细胞培养成功率分析 42
一、组织和细胞供体年龄 42
四、培养方法 43
二、培养条件 43
三、贴附底物 43
第四节 建立细胞系或细胞株 44
一、体外培养细胞的种类和命名 44
二、建立细胞系（或株）的要求 45
三、已建立细胞系或株的鉴定、管理和使用 46
第二章 体外培养细胞生存条件、环境和代谢 47
第一节 生存环境和条件 47
一、无污染环境 47
二、温度 47
三、生存空间 47
四、气体环境和氢离子浓度 48
五、体外培养细胞所需基本物质 50
六、渗透压 56
七、附着底物 56
第二节 用于培养的基础液体 57
一、水 57
二、平衡盐溶液或缓冲液 57
第三节 培养用液 59
一、人工合成培养基 59
二、血清 62
三、无血清培养基 65
四、其他培养用液 72
五、培养用液种类和制备 76
第三章 组织培养设施和基本条件 79
第一节 实验室设计 79
一、设计原则 79
二、培养室组成 80
第二节 大型设施 81
一、净化工作台 82
二、无菌操作室 82
第三节 实验室设备 83
一、电热箱 83
三、无菌操作箱 83
二、冰箱 84
三、显微镜 84
四、水纯化装置 84
五、洗刷装置 85
六、抽滤系统 85
七、细胞冷冻贮存器 86
八、离心机 86
九、天平 86
十、加液器装置 86
一、玻璃瓶皿 87
第四节 培养器皿 87
十一、器械 87
二、塑料瓶皿 88
第四章 培养瓶、皿的清洗和消毒 90
第一节 清洗 90
一、玻璃瓶皿的清洗 90
二、胶塞的清洗 93
三、塑料器皿的清洗 93
第二节包装 93
第三节 消毒 94
一、消毒手段 94
三、培养用瓶皿、器械等的消毒 96
二、对培养液体消毒和保存 96
第五章 组织培养基本技术和知识 98
第一节 培养前准备 98
一、培养操作准备 98
二、操作野消毒 98
三、洗手和着装 99
四、火焰消毒 99
第二节 培养基本操作 99
一、取材 99
二、把组织分离成细胞 101
三、细胞计数法 109
四、细胞冻存 111
五、细胞运送 113
第三节 实验工作安全问题 113
一、概述 113
二、危险事故和防范 114
三、发生事故相关性因素的分析 115
第六章 组织培养的污染、检测和排除 117
第一节 污染途径 117
第二节 污染对细胞的影响 118
三、支原体污染 119
二、细菌污染 119
一、真菌污染 119
第三节 微生物污染的排除 123
一、抗生素除菌法 123
二、加温除菌法 124
三、动物体内接种除菌法 124
四、巨噬细胞吞噬法 124
第七章 单层细胞培养技术 125
第一节 常规细胞培养方法 125
一、天然培养基组织培养法 125
二、人工合成培养基组织培养法 125
一、二倍体细胞培养法 131
第二节 特殊培养法 131
二、单细胞分离（克隆）培养 132
三、加支持物培养法 137
四、球体细胞培养法 141
五、悬浮培养法 142
第三节 动物组织细胞的培养 143
一、鸡胚心肌细胞培养 143
二、小鼠胚胎干细胞培养 143
三、大鼠骨细胞的分离和培养 146
四、家兔关节软骨细胞培养 149
一、淋巴细胞培养 150
第四节 人体各类组织细胞的培养 150
二、利用骨髓培养造血细胞 152
三、血管内皮细胞培养 155
四、人真皮成纤维细胞培养 161
五、脂肪细胞的培养、生长和分化 166
六、软骨细胞、肌腱细胞和韧带细胞的分离和培养 177
七、人骨成骨细胞的分离和培养 182
八、人子宫平滑肌细胞培养 188
九、人骨骼肌细胞培养 190
十、人乳腺上皮细胞培养 192
十一、人毛发外根鞘表皮细胞培养 195
十二、人皮肤表皮角质细胞的培养 200
十三、胃上皮细胞的培养 204
十四、神经组织培养 209
第五节 肿瘤细胞培养 212
一、肿瘤培养细胞生物学特性 212
二、培养方法 213
第八章 组织类型培养和三维（三D）培养技术 218
第一节 组织类型培养 219
一、细胞微球培养 219
二、藻酸包被微球和软骨细胞培养 221
三、滤槽插入培养 224
四、神经组织切片培养 227
五、聚集神经细胞培养 230
第二节 三维培养技术 231
一、干细胞 232
二、支架选择 240
三、细胞接种和构建CSC方式 241
四、三维培养 242
第三节 支架（Scaffold） 245
一、支架种类 245
二、支架材料加工的基本理论和技术纲要 251
第四节 三维组织培养组织工程实施范例 265
一、在无细胞基质上的复合表皮角质细胞移植物的制备和移植 265
二、3D细胞培养乳房再建组织工程 271
三、肝细胞三维培养器的发展 276
四、膜包被细胞微球 280
第五节 三维培养调控理论和措施 283
一、概述 283
二、细胞增殖和分化 284
三、促血管生长 291
四、血小板生长因子（PDGF）在创伤修复中的作用 295
第九章 组织培养细胞生物学性状检测 298
第一节 细胞一般形态学观察法 298
一、固定细胞观察法 298
二、电子显微镜（电镜）观察法 302
二、标本制备及固定 304
第二节 免疫细胞化学技术观察细胞成分法 304
一、原理 304
三、染色方法 305
第三节 活细胞直接观察方法 309
一、相差观察和摄影 309
二、缩时显微摄电影和闭路电视记录 311
第四节 培养细胞生物学性状检测 311
一、细胞培养常规检查 311
二、细胞形态学检测技术 312
三、细胞增殖生长方面 314
四、培养细胞凋亡（死亡）检测 321
五、同工酶（Isoenzyme）检测 324
六、抗原标记 325
第十章 细胞遗传学性状的检测 327
第一节 性染色质检测 327
一、原理 327
二、方法 327
第二节 培养细胞染色体显示法 329
一、原理 329
二、传代培养细胞染色体显示法 330
三、人末梢血微量全血培养染色体显示法 332
四、羊水细胞培养 333
一、染色体显带 334
第三节 染色体结构显示和检测 334
二、姐妹染色单体分化染色 337
三、染色体脆性位点的检测 339
四、微核检测 340
第四节 染色体基因定位 341
一、细胞原位杂交基因定位原理 341
二、荧光标记原位杂交法 342
第十一章 组织培养细胞工程技术 349
第一节 建立突变细胞系 349
一、原理 349
二、方法 350
第二节 细胞融合 352
一、原理 353
二、聚乙二醇融合法 353
第三节 细胞脱核法 355
一、原理 355
二、方法 356
第四节 细胞同步化（Synehrony）法 357
第十二章 体外培养细胞的转化和DNA转导技术 360
第一节基本概念和原理 360
一、细胞转化与恶变 360
二、细胞转化基本过程 361
第二节 诱变因素诱发培养细胞转化程序 362
一、细胞选择 362
二、诱发培养细胞转化 364
三、转化细胞的检测 365
第三节 几种常用转化细胞和转化技术 366
一、致癌化学物转化细胞 366
二、病毒转化细胞 366
三、癌基因转化细胞 368
第四节 基因细胞内导入技术 368
一、基因导入的概述 368
二、技术方法 370
第五节 转基因技术 382
二、方法 383
一、基本原理 383
第十三章 组织培养在生物科学中的应用 391
第一节 异生素（Xenobioties）毒性检测概述 391
一、利用培养细胞检测毒性概述 391
二、基本知识和注意事项 395
三、快速检测细胞生存状态 395
四、检测细胞生长和增殖 397
五、抗癌药检测 407
第二节 细胞培养在杂交瘤技术中的应用 411
六、医疗和功能性药物检测 411
一、原理 412
二、杂交瘤细胞的制备 414
三、单克隆抗体的大量制备 417
第三节 酶联免疫吸附测定（ELISA）技术在抗体检测中的应用 418
一、原理 418
二、操作流程、类型及特点 418
三、实验条件及注意事项 420
四、实验室中的几种酶联免疫测定方法及其用途 423
一、细胞和基因 425
第一节 分子细胞学与基因 425
第二篇 分子细胞学技术 425
第十四章 分子细胞学基本理论知识 425
二、RNA生物学性状 431
三、遗传和变异 431
第二节 细胞基因工程概要 432
一、细胞基因工程原理 432
二、培养细胞和细胞基因工程 432
三、分子细胞学实验安全知识 432
一、细胞培养用设备 434
二、分析仪器室 434
第一节 基本设备条件 434
第十五章 分子细胞学实验室基本设备、技术原理和常规技术操作 434
三、离心机室 436
四、放射性核素实验室 436
五、暗室 436
六、洗涤室 436
第二节 细胞中大分子的分离、纯化等常规技术 437
一、层析分离法 437
二、核酸提取法 443
三、电泳技术 452
四、细菌培养技术 461
五、噬菌体的培养、滴定和保存 469
第一节 工具酶、质粒和噬菌体 472
一、工具酶 472
第十六章 细胞基因工程 472
二、载体 480
三、核素探针标记技术 496
四、非放射性标记法 508
第二节 DNA分子重组（体外连接） 510
一、DNA物理图谱 510
二、DNA体外连接 513
三、影响连接相关因素 520
四、重组子转化和扩增 520
第三节 基因克隆 523
一、基因组文库法 524
二、cDNA文库 533
第四节 体外基因（DNA）扩增 540
一、PCR原理 541
二、PCR反应条件的选定 541
三、PCR方法 546
四、PCR反应最适条件的选择 547
五、PCR产物分析方法 547
六、PCR结果及可能的原因 547
八、PCR实验操作的注意事项 548
九、PCR技术的应用 548
七、PCR技术基本特点 548
第五节 未知基因的探查 551
一、差减cDNA文库法 551
二、差异显示法 558
第六节 同源重组基因打靶（Targeting） 561
一、同源重组纲要 561
二、同源重组技术方法 566
三、制备纯合突变胚胎干细胞系 572
四、试剂和液体 575
第一节DNA（基因）探查检测 577
一、DNA印迹（Southern Blot） 577
第十七章 培养细胞基因性状探查和表达的检测 577
二、点迹印迹杂交 579
第二节 培养细胞中RNA的检测 582
一、甲醛胶电泳分离RNA及Northern Blot的基本原理 582
二、方法 582
第三节 蛋白质检测 584
一、Western Blot 584
二、酵母双杂合系统筛选相互作用蛋白 587
第四节 基因性状的其他检测方法 601
一、基因长度多态性检测 601
二、基因遗传变异检测 603
一、基本原理 604
二、试剂和设备 604
第五节 DNA序列分析 604
三、实验方法 605
四、序列的解读（图17-8） 611
第六节 CpG岛甲基化分析 612
一、非序列特异性甲基化分析 612
二、序列特异性甲基化分析 613
三、全基因组序列特异性甲基化分析 621
第十八章 基因诊断和治疗技术 624
第一节 关于基因诊断和治疗 624
第二节 基因诊断和治疗的理论基础 624
一、基因结构改变 625
二、基因诊断 626
三、基因治疗 628
附录 633
第一部分 相关资料和数据 633
一、常用缩写词 633
二、重要名词释义 637
三、人和动物的一些主要细胞系（或株） 644
四、基本单位和数据 648
五、核酸数据 651
六、遗传密码 653
七、氨基酸和蛋白质数据 654
八、杂用干液 655
九、缓冲液 656
十、电泳数据 661
十一、酸和碱数据 662
十二、常用层析数据 663
十三、培养基 664
十四、载体 669
十五、细菌菌株一览表 669
十六、常见大肠杆菌菌株遗传标记 671
第二部分 电泳后DNA片段的分析 673
第三部分 分子生物学技术入门实验指导 675
实验一 测量、微吸和消毒 675
实验二 细菌培养技术 681
实验三 DNA限制性分析 689
实验四 DNA甲基化效应 698
实验五 用质粒DNA快速集落转化E.coli 702
实验六 质粒DNA的纯化和鉴定 708
实验七 抗生素抗性基因重组 716
实验八 用重组DNA转化E.coli 721
实验九 复制铺板法确认混合的E.coli种群 727
实验十 重组DNA的纯化和鉴定 729
生物产品供应商介绍 739
参考文献 742
索引 743