目录 1
第一章 绪论 1
第一节 动物细胞培养技术的发展历史 1
一、动物细胞培养技术应用的起始阶段 1
二、动物细胞培养技术的应用过程 2
三、动物细胞培养技术的产业化阶段 3
第二节 动物细胞培养技术的实际应用 4
一、生产天然药用蛋白 4
二、基因重组蛋白的临床应用 5
三、制备单克隆抗体 6
四、对环境和动物保护的作用 6
五、新药研发 7
第三节 动物细胞培养技术的发展方向 8
一、临床生物治疗 8
二、疫苗研制 8
三、药理检测模型 9
参考文献 9
第二章 动物细胞培养技术的基本理论 10
一、贴附生长 11
第一节 动物细胞的生长特征 11
二、生长的接触抑制及密度依赖性 12
第二节 动物细胞的增殖过程 12
一、潜伏期 13
二、对数生长期 13
三、稳定期 13
一、培养细胞的生长方式 14
二、细胞培养的条件 14
第三节 动物细胞体外培养的生长方式和条件 14
四、衰亡期 14
三、微载体培养技术在动物细胞培养中的应用 22
第四节 细胞系建立、保存和鉴定 24
一、基本概念 24
二、建立细胞系（株）的档案 25
三、细胞系的鉴定 25
四、细胞系（株）的保藏 26
第五节 动物细胞培养的放大技术与生物反应器 26
一、细胞培养规模的放大 26
二、动物细胞培养用生物反应器 27
三、培养过程监控 30
参考文献 31
四、结语 31
第三章 动物细胞培养在单克隆抗体制备中的应用 33
第一节 杂交瘤技术的基本原理和过程 33
一、小鼠体系 33
二、大鼠体系 45
三、人体系 47
第二节 杂交瘤细胞高密度无血清悬浮培养技术 49
一、影响杂交瘤细胞体外培养的主要因素 49
二、动物细胞大规模培养操作方法 52
三、动物细胞培养生物反应器 54
四、动物细胞的微囊化培养 55
五、杂交瘤细胞大规模培养生产抗体 56
第三节 单克隆抗体的分离纯化 57
一、鼠腹水中单克隆抗体的初步纯化 57
二、细胞培养液中单克隆抗体的浓缩 58
三、亲和色谱纯化抗体 59
四、离子交换色谱纯化抗体 62
五、凝胶过滤色谱纯化抗体 66
六、高纯度单克隆抗体纯化方案设计 68
一、体外应用 69
第四节 单克隆抗体的应用 69
二、体内应用 71
参考文献 78
第四章 外源基因在动物细胞中的表达与产物纯化 80
第一节 动物宿主细胞 80
四、MDCK细胞 81
五、Namalwa细胞 81
六、Vero细胞 81
三、C127细胞 81
二、CHO-K1细胞 81
一、BHK-21细胞 81
七、鼠骨髓瘤细胞 82
八、COS细胞 82
第二节 动物细胞的基因转染技术 82
一、光穿孔法 83
二、冲击波法 84
三、基因枪法 84
四、电穿孔法 84
五、磷酸钙共沉淀法 84
六、脂质体法 84
一、表达载体与宿主细胞 85
第三节 蛋白表达条件的优化 85
八、其他 85
七、抗体转染法 85
二、改变重组工程细胞特性，延长培养周期 93
三、重组工程细胞培养工艺的优化 95
第四节 动物细胞表达的基因重组蛋白的分离纯化 96
一、动物细胞生产的基因重组蛋白的性质 97
二、下游纯化过程简介 97
三、下游纯化工艺的设计 98
四、细胞分离 99
五、精制步骤 105
一、去除杂蛋白 106
六、问题 106
第五节 动物细胞培养和纯化过程中生物污染物的控制 106
二、去除微生物，保持无菌状态 107
参考文献 111
第五章 动物细胞培养法生产疫苗 112
第一节 疫苗发展历程 112
一、疫苗的历史 112
二、疫苗的分类 112
三、人用疫苗的发展趋势 113
四、兽用疫苗现状 115
五、疫苗接种的意义 116
六、目前国内应用疫苗的种类和简介 117
第二节 疫苗制品纯化技术 119
一、细胞破碎 119
二、离心沉降技术 120
三、膜分离技术 121
四、凝胶过滤技术 122
五、离子交换色谱 123
六、疫苗制备过程中纯化技术的实际应用 124
一、森林脑炎疫苗制造 125
第三节 动物细胞培养技术在疫苗生产中的应用 125
二、流行性乙型脑炎灭活疫苗制造 127
三、口服脊髓灰质炎活疫苗制造 129
四、人用浓缩狂犬病疫苗制造 130
五、冻干麻疹活疫苗制造 131
六、冻干流行性腮腺炎活疫苗制造 134
七、细胞生物反应器微载体培养草鱼出血病疫苗 136
八、二次细胞技术在疫苗生产上的应用 136
九、同批次细胞基质收获甲肝和麻疹病毒制备联合疫苗的方法 137
十、同时感染法制备甲肝（LA1）减毒活疫苗 137
参考文献 138
十一、管道化生产CHO细胞重组乙肝疫苗 138
第一节 概述 140
第六章 动物细胞培养法生产基因重组蛋白药物 140
第二节 哺乳动物细胞培养生产基因重组蛋白药物 142
一、基因重组蛋白药物在哺乳动物细胞表达的基本步骤 143
二、哺乳动物细胞的大规模培养 144
三、用哺乳动物细胞生产的基因重组蛋白药物 150
第三节 昆虫细胞生产基因重组蛋白药物 153
二、昆虫细胞系中常用的表达载体 154
三、稳定转染昆虫细胞系的繁殖和表达 154
一、常用的昆虫细胞系 154
四、稳定转染细胞表达外源蛋白 155
参考文献 155
第七章 动物细胞培养在组织工程中的应用 157
第一节 组织工程化生物反应器——人工肝 157
一、肝细胞的来源 158
二、生物人工肝系统中反应器 159
第二节 皮肤组织工程细胞和组织工程化皮肤 162
一、皮肤组织工程细胞 162
二、组织工程化皮肤 164
第三节 组织工程技术在骨缺损修复中的应用 167
三、展望 167
一、骨组织工程研究进展 168
二、骨髓基质干细胞的定向诱导分化 169
三、细胞型骨组织工程技术修复骨缺损 171
参考文献 172
第八章 细胞培养技术在SARS研究中的应用 174
一、SARS病毒简介 174
二、细胞培养在SARS病毒鉴定和检测中的应用 174
三、组织细胞培养在抗SARS药物研制中的应用 175
参考文献 177
第九章 树突状细胞的制备技术 178
一、外周血树突状细胞的分离 178
二、小鼠髓源性树突状细胞的制备 182
三、从小鼠胸腺前体细胞诱生树突状细胞 185
四、人树突状细胞的体外诱导分化 189
五、从纯化的CD14+单核细胞诱生树突状细胞 194
六、用于肿瘤免疫治疗的血源人树突状细胞制备 201
参考文献 205
附录 生物制品生产用动物细胞制备及检定规程 208