第一章 绪论 1
一、实验须知 1
二、微生物学实验室常用的器皿 2
三、显微镜简介及实验中常用的仪器和设备 6
第一篇 普通微生物学实验 18
第二章 微生物形态的观察技术 18
实验1 实验室环境和人体体表微生物的检测 18
实验2 细菌形态的观察 21
实验3 细菌的简单染色和革兰氏染色 24
实验4 细菌的芽孢、英膜和鞭毛染色 27
实验5 微生物细胞核的染色和细菌染色体DNA的提取 30
实验6 细菌细胞壁的染色和质壁分离的观察 31
实验7 大肠杆菌λ噬茵体形态的电镜观察 33
实验8 放线茵和真菌形态的观察 34
实验9 微生物测微技术和计数 37
第三章 微生物的培养技术 41
实验10 培养基的制备与灭菌 41
实验11 微生物的纯种分离培养 44
实验12 生长谱法测定微生物的营养要求 49
实验13 大肠杆菌生长曲线的测定 50
实验14 大肠杆菌λ噬菌体效价测定和半乳糖发酵基因的转导 51
实验15 环境因素对微生物生长发育的影响 53
实验16 链霉素的效价测定 56
实验17 血清学反应——凝集反应、沉淀反应、琼脂扩散实验 58
实验18 水的细菌学检查——细菌总数的测定 62
第四章 应用微生物学技术 62
实验19 多管发酵法测定水中大肠菌群 65
实验20 微生物多糖——黄原胶的发酵和提取 70
实验21 黄原胶溶液性能的测定 72
实验22 产蛋白酶和淀粉酶芽孢杆菌的分离和酶活力检测 74
实验23 杀虫微生物——苏云金芽孢杆菌的深层发酵 77
实验24 细菌鉴定中常用的生理生化反应 79
实验25 利用BIOLOG系统进行微生物的分类鉴定 84
实验26 微生物发酵法制备生物降解材料——聚羟基脂肪酸酯(PHA) 86
第二篇 专业微生物学实验 89
第五章 真菌学 89
实验27 真菌形态及各类孢子的观察 89
实验28 真菌孢子的萌发 92
实验29 丝状真菌生长的测定 94
实验30 不同碳源对真菌生长的影响 96
实验31 矿物质营养对真菌生长的影响 97
实验32 无机氮源对真菌生长的影响 98
实验33 理化因素对真菌生长的影响 99
实验34 酵母茵细胞形态及培养特征的观察 100
实验35 丝状真菌米曲霉营养缺陷型的筛选与鉴定 102
实验36 丝状真菌米曲霉原生质体的形成和再生 104
实验37 丝状真菌米曲霉原生质体融合及融合子的筛选 106
实验38 黄曲霉毒素的提取及测定 109
实验39 真菌生物碱的测定 112
实验40 真菌多糖的提取及测定 114
实验41 丝状真菌总DNA的提取和测定 115
实验42 丝状真菌深黄被孢霉总RNA的分离和检测 117
实验43 RT-PCR扩增深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因 120
实验44 深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆 123
实验45 曲霉属(Aspergillus)群的分离和鉴定 126
实验46 青霉属(Penicillium)系的鉴定 130
实验47 镰刀茵属(Fusarium)组的分离和鉴定 134
第六章 微生物生理学 137
实验48 正交试验法对黄原胶发酵最佳培养基和培养条件的选择与优化 137
实验49 革兰氏阳性茵细胞壁的分离与纯化 143
实验50 酵母菌质粒DNA的分离提取 144
实验51 质粒DNA的纯度测定及定量分析 146
实验52 琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA 148
实验53 用限制性内切酶消化λ噬菌体DNA片段的电泳检测和分析 150
实验54 啤酒酵母非活性RNA的制备 152
实验55 啤酒酵母非活性RNA含量的测定 153
实验56 RNA的酶促降解 154
实验57 5′-单核苷酸的纸电泳鉴定 155
实验58 酵母菌底物水平磷酸化合成ATP 156
第七章 微生物遗传学 158
实验59 苏云金芽孢杆菌ICP基因的检测 158
实验60 T4噬菌体基因组rⅡ区域不同基因突变的互补 160
实验61 大肠杆菌的高压电穿孔转化技术 163
实验62 噬菌体T4一步生长实验和Doermann实验 165
实验63 病毒的细胞培养技术 170
第八章 病毒学 170
实验64 病毒的纯化 171
实验65 病毒的毒力测定 173
第九章 免疫学 176
实验66 血清中IgG的分离(中性盐沉淀法) 176
实验67 抗体的精制(离子交换色谱法) 177
实验68 抗血清效价的测定 179
实验69 酶联免疫吸附试验 181
第三篇 分子微生物学实验 184
第十章 分子微生物学基础实验 184
实验70 大肠杆菌(E.coli)乳糖操纵子——酶的诱导及酶活性测定 184
实验71 λ噬菌体DNA的多种内切酶的物理图谱 188
实验72 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定啤酒酵母菌胞外蛋白质分子量 192
实验73 啤酒酵母的脉冲电泳核型分析 195
实验74 大肠杆菌对紫外线辐射的修复机制 202
实验75 苏云金芽孢杆菌新型vip基因的RFLP分析 204
实验76 绿色荧光蛋白(GFP)的转化表达及免疫印迹检测 206
实验77 干扰素(IFN)的转化表达及双抗体夹心法检测 211
附录 214
附录一 染色液的配制 214
附录二 培养基的制备 217
附录三 试剂和溶液的配制 227
附录四 实验中所用微生物学名 235
附录五 各国主要菌种保藏机构 237
参考书目 238