第一篇 生物化学与分子生物学实验概论 3
第1章 生物化学与分子生物学实验的基本要求 3
第一节 实验室的基本要求 3
一、实验室规则 3
二、实验室安全 3
第二节 实验记录与实验报告的基本要求 5
一、实验记录 5
二、实验数据的处理 9
三、实验误差分析与处理 10
四、实验报告的要求 15
第2章 生物化学与分子生物学实验基本技能训练 17
第一节 基本操作技能 17
一、玻璃仪器的洗涤与干燥 17
二、溶液的混匀 18
三、过滤、加热与冷却 19
第二节 基本器材与仪器的使用 21
一、刻度吸管的使用 21
二、可调微量移液器的使用 22
三、容量瓶的使用 23
四、电子天平的使用 23
五、pH计的使用 25
第3章 生物化学与分子生物学实验样品的制备 27
第一节 样品制备的基本原则与策略 27
一、生物样品制备的基本原则 27
二、生物样品制备的基本策略 28
第二节 常用实验样品的制备 28
一、血液样品 29
二、尿液样品 29
三、组织样品 30
四、微生物样品 31
五、植物样品 31
第三节 生物大分子的制备 31
一、核酸的分离纯化 31
二、蛋白质的分离纯化 33
第二篇 生物化学与分子生物学实验技术的基本原理 39
第4章 分光光度技术 39
第一节 基本原理 39
一、光的基本知识 39
二、朗伯-比尔定律 40
第二节 分光光度技术的应用 41
一、定量分析 41
二、定性分析 42
三、纯度检测 43
四、分光光度法的误差 43
第三节 分光光度计的基本结构及使用 43
一、分光光度计的基本构造 44
二、常见分光光度计的使用 44
三、分光光度计使用的注意事项 46
第5章 电泳技术 47
第一节 基本原理 47
一、电泳的原理 47
二、影响电泳速度的外界因素 48
第二节 电泳分类 48
一、按工作原理分类 48
二、按分离目的分类 49
三、按用法分类 49
第三节 常用电泳技术 49
一、纸电泳 49
二、醋酸纤维素薄膜电泳 50
三、琼脂糖凝胶电泳 51
四、聚丙烯酰胺凝胶电泳 51
五、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 53
六、等电聚焦电泳 53
七、双向凝胶电泳 54
八、免疫电泳 56
九、毛细管电泳 57
第四节 电泳装置的结构及使用 58
一、电泳装置 58
二、使用方法 61
第6章 层析技术 63
第一节 基本原理 63
一、层析的基本概念 63
二、层析的基本原理 64
三、层析技术的分类 66
第二节 吸附层析 66
一、吸附层析的原理 66
二、吸附层析的分类 67
三、吸附剂和洗脱剂的选择 68
第三节 分配层析 69
一、分配层析的原理 69
二、纸层析 69
第四节 离子交换层析 70
一、离子交换层析的原理 70
二、离子交换剂的类型 71
三、离子交换层析的应用 71
四、离子交换树脂的处理 72
第五节 凝胶层析 72
一、凝胶层析的原理 72
二、凝胶层析的实验技术 73
三、凝胶层析的应用 75
第六节 亲和层析 76
一、亲和层析的原理 76
二、亲和层析的基本过程 76
三、亲和层析载体、配体的选择与偶联 77
第7章 离心技术 79
第一节 离心技术的基本原理 79
一、离心力 80
二、相对离心力 80
三、沉降系数 80
第二节 离心分离的常用方法 81
一、沉淀离心法 81
二、差速离心法 81
三、密度梯度离心法 82
第三节 离心机的分类及使用 84
一、制备型离心机 84
二、分析型离心机 85
三、离心操作注意事项及其维护保养 85
第8章 核酸分子杂交技术 87
第一节 基本原理 87
一、DNA的变性 87
二、DNA的复性 88
三、核酸分子杂交 88
第二节 核酸探针及其标记 89
一、核酸探针 89
二、探针的标记 90
第三节 常用核酸分子杂交技术 93
一、固相杂交技术 93
二、液相杂交技术 95
三、核酸分子杂交实验条件的优化 97
第三篇 基本型实验 103
第9章 蛋白质、氨基酸实验 103
第一节 蛋白质的定量测定 103
实验1蛋白质的定量测定（微量凯氏定氮法） 104
实验2蛋白质的定量测定（双缩脲法） 108
实验3蛋白质的定量测定（Folin-酚试剂法） 110
实验4蛋白质的定量测定（BCA法） 112
实验5蛋白质的定量测定（考马斯亮蓝染色法） 114
实验6蛋白质的定量测定（紫外吸收法） 116
第二节 蛋白质相对分子量测定（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳） 118
第三节 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量 125
第四节 氨基酸的薄层层析 129
第五节 氨基酸的纸层析 132
第10章 酶学实验 136
第一节 过氧化氢酶米氏常数的测定 136
第二节 血清丙氨酸氨基转移酶活性测定（赖氏法） 139
第三节 琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 142
第四节 乳酸脱氢酶同工酶琼脂糖电泳法测定 144
第11章 糖类、脂类实验 147
第一节 血糖的定量测定 147
实验1血糖的定量测定（Folin-吴宪法） 148
实验2血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法） 151
实验3血糖的定量测定（己糖激酶法） 153
第二节 乳酸的定性分析与定量测定 155
实验1尿中乳酸含量的定性分析 156
实验2血液中乳酸含量的定量测定 157
第三节 血清甘油三酯的测定（乙酰丙酮显色法） 159
第四节 血清总胆固醇的测定（胆固醇氧化酶法） 162
第12章 核酸实验 165
第一节 核酸的定量测定 165
实验1 核酸的定量测定（定磷法） 165
实验2 核酸的定量测定（紫外吸收法） 168
实验3 DNA的定量测定（二苯胺法） 169
实验4 RNA的定量测定（地衣酚法） 171
第二节 核酸的琼脂糖凝胶电泳 173
实验1 DNA的琼脂糖凝胶电泳 173
实验2 RNA的甲醛变性凝胶电泳 176
第三节 核酸的聚丙烯酰胺凝胶电泳 179
第四节 DNA的聚合酶链式反应 181
第四篇 综合设计型实验 191
第13章 综合性实验 191
第一节 血清清蛋白、γ-球蛋白的分离纯化与定量 191
第二节 碱性磷酸酶的分离纯化、比活性测定与动力学分析 201
实验1碱性磷酸酶的分离纯化和比活性测定 201
实验2底物浓度对碱性磷酸酶活性的影响 205
实验3 pH对碱性磷酸酶活性的影响 208
实验4温度对碱性磷酸酶活性的影响 210
第三节 肝糖原的提取、鉴定与定量 212
实验1肝糖原的提取与鉴定 212
实验2肝糖原定量测定 214
第四节 血清脂蛋白的电泳分离与定量测定 216
实验1血清脂蛋白的琼脂糖凝胶电泳 218
实验2血清高密度脂蛋白-胆固醇的分离与定量测定（磷钨酸-镁沉淀法） 221
第五节 质粒DNA的提取、定量与酶切鉴定 224
实验1质粒DNA的小量提取（碱裂解法） 225
实验2高纯质粒小量制备（试剂盒法，离心柱型） 230
实验3质粒DNA的定量（紫外分光光度法） 232
实验4质粒DNA的酶切鉴定 233
第六节 基因组DNA的提取、定量与鉴定 238
实验1细菌基因组DNA的提取、定量与鉴定 238
实验2动物组织基因组DNA的提取、定量与鉴定 241
第七节 总RNA的提取、定量与逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR） 244
实验1总RNA的提取与定量 245
实验2逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR） 249
第八节 Southern杂交 254
实验1基因组DNA样品的限制性酶切 254
实验2酶切样品的琼脂糖凝胶电泳 256
实验3 DNA的变性、转膜与固定 258
实验4杂交与杂交后清洗 260
实验5杂交结果的检测 262
第九节 斑点或狭缝杂交 264
第14章 设计性实验 270
第一节 设计性实验的基本程序 270
一、选题定题 270
二、实验设计 272
三、实验实施 274
四、实验总结 275
第二节 生物化学与分子生物学实验设计的基本思路 275
一、蛋白质研究的实验设计 275
二、酶学研究的实验设计 279
三、核酸研究的实验设计 282
四、糖类的实验设计 287
五、脂类及维生素的实验设计 289
第五篇 研究创新型实验 293
第15章 分子克隆实验 293
第一节 目的基因的分离与载体的选择 294
实验1目的基因的分离 294
实验2载体的选择 297
第二节 目的基因与载体的限制性酶切及酶切产物的回收 299
实验1目的基因与载体的限制性酶切 299
实验2酶切产物的回收 303
第三节 目的基因与载体的连接 306
实验1酶切产物的克隆（T4 DNA连接酶法） 307
实验2 PCR产物的TA克隆 310
第四节 重组DNA的导入 313
第五节 阳性重组体的筛选与鉴定 316
实验1阳性重组体的筛选（a-互补法） 317
实验2阳性重组体的鉴定（菌落PCR法） 319
第六节 目的基因的表达及鉴定 321
第七节 研究创新型实验设计：绿色荧光蛋白（GFP）的基因克隆与表达 323
附录 生物化学与分子生物学实验试剂的配制与保存及常用数据表 329
附录A 试剂的配制与保存 329
一、化学试剂分级及注意事项 329
（一）化学试剂纯度分级表 329
（二）试剂配制的一般注意事项 329
（三）易变质及需要特殊方法保存的试剂 330
二、常用试剂及溶液的配制 330
（一）常用清洗液的配制 330
（二）常用试剂的配制 331
（三）常用缓冲液的配制 333
（四）电泳常用缓冲液的配制 338
（五）常用储存液的配制 339
三、细菌实验试剂的配制与保存 340
（一）细菌培养基的配制 340
（二）抗生素的配制 342
（三）细菌的保存 343
附录B 常用数据表 344
一、常用蛋白质相对分子质量标准数据 344
二、氨基酸的主要参数 344
三、核酸、蛋白质换算数据 345
四、常用核酸相对分子质量标准数据 346
五、琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围 346
六、PAGE凝胶配方（核酸电泳用） 346
七、SDS-PAGE的浓缩胶（5% Acrylamide）配方 347
八、SDS-PAGE分离胶配方 348
九、SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围 349
参考文献 350