第一篇 常用医学分析与检测实验技术 1
第一章 光谱分析技术 1
第一节 光谱分析的基本原理 1
第二节 常用光谱分析的方法及应用 2
一、紫外-可见分光光度法 2
二、红外光谱法 5
三、原子吸收分光光度法 7
四、分子荧光光谱法 8
五、原子荧光光谱法 9
六、旋光仪法 10
第二章 电泳技术 12
第一节 电泳的基本原理 12
一、基本原理 12
二、影响电泳速度的因素 13
三、电泳的基本装置 14
四、电泳后的固定、染色和脱色 14
五、电泳结果的定量分析 15
第二节 常用的电泳方法及应用 15
一、聚丙烯酰胺凝胶电泳 15
二、等电聚焦电泳 17
三、双向电泳 18
四、毛细管电泳 18
五、脉冲场凝胶电泳 19
六、免疫电泳 20
第三章 层析技术 21
第一节 层析的基本原理 21
一、分配平衡 21
二、塔板理论 22
第二节 常用的层析方法及应用 22
一、吸附层析 22
二、分配层析 23
三、离子交换层析 24
四、凝胶过滤层析 26
五、亲和层析 28
六、薄层层析 29
七、高效液相层析 30
第四章 离心技术 31
第一节 离心的基本原理 31
一、离心的一般原理 31
二、离心力和相对离心力 31
三、沉降速度 33
四、沉降系数 33
五、沉降时间 33
六、测定相对分子质量 34
第二节 离心设备 34
一、离心机 34
二、离心机的基本构造 35
三、离心转头 35
四、离心管 36
五、离心机使用注意事项 36
第三节 常用离心方法及应用 37
一、制备离心技术 37
二、分析超速离心技术 41
第五章 基因工程技术 42
第一节 基因工程的基本原理和步骤 42
第二节 基因工程载体 43
一、质粒载体 43
二、噬菌体载体 44
三、动物病毒载体 44
四、酵母人工染色体载体 45
第三节 基因工程中常用的工具酶 45
一、限制性核酸内切酶的概念 45
二、限制性核酸内切酶的分类 46
三、限制性核酸内切酶的命名 46
四、限制性核酸内切酶的作用机制 46
第四节 目的基因的获取 47
一、人工化学合成 47
二、基因组DNA文库 48
三、cDNA文库 48
四、聚合酶链反应 48
第五节 目的基因与载体的连接 48
一、黏性末端连接 49
二、平端连接 49
三、人工接头连接 49
第六节 重组DNA分子导入宿主细胞 49
一、转化 50
二、转染和感染 50
第七节 重组分子的筛选与鉴定 50
一、根据重组载体的标志进行筛选 50
二、核酸分子杂交法 51
三、免疫学方法 51
四、DNA限制性内切酶图谱分析 51
五、核苷酸序列测定 51
第六章 聚合酶链反应技术 52
第一节 PCR的基本原理 52
第二节 PCR反应体系中的成分及其作用 53
一、寡核苷酸引物 53
二、DNA模板 53
三、缓冲液 53
四、DNA聚合酶 53
五、脱氧核苷三磷酸 54
第三节 PCR引物设计的一般原则 55
一、引物长度 55
二、引物末端 55
三、引物的G、 C含量和Tm值 55
四、引物的位置 56
第四节 PCR相关技术 56
一、通用PCR 56
二、逆转录PCR 57
三、原位PCR 57
四、重组PCR 57
五、巢式PCR 58
六、不对称PCR 58
七、实时荧光定量PCR 59
第七章 DNA序列分析技术 61
第一节 DNA序列测定的原理和技术 61
一、DNA测序原理 61
二、DNA测序策略 62
三、DNA测序的常用技术 63
第二节 全自动激光荧光DNA测序 63
一、全自动激光荧光DNA测序原理 64
二、全自动激光荧光DNA测序注意事项 65
三、自动激光荧光DNA测序程序 65
第八章 免疫学检测技术 69
第一节 抗原-抗体反应 69
一、抗原-抗体反应的原理 69
二、抗原-抗体反应的特点 70
三、影响抗原-抗体反应的因素 71
四、抗原-抗体反应的类型 72
第二节 免疫细胞检测技术 77
一、淋巴细胞的分离与类型鉴定 77
二、白细胞功能测定 79
第三节 免疫学检测方法的应用 81
一、免疫学检测方法的评估与选择 81
二、疾病的诊断 82
三、免疫学监测 82
第二篇 常用分析与检测仪器和基本实验 83
第九章 常用分析与检测仪器及基本操作 83
第一节 常用分析与检测仪器 83
一、常用玻璃仪器 83
二、电子天平 85
三、酸度计 87
四、熔点仪 90
第二节 分析与检测实验装置及基本操作 93
一、化学试剂的取用 93
二、玻璃量器的使用 94
三、常用加热器具及其使用 103
四、蒸发、结晶、固液分离 109
五、干燥及干燥剂的使用 113
六、温度计的使用 117
七、试纸的使用 118
八、搅拌与搅拌器 119
九、蒸馏与回流 120
第十章 分析与检测基本实验 126
实验一 滴定分析 126
实验二 缓冲溶液的性质与应用 134
实验三 离子的分离与鉴定 138
实验四 有机化合物物理常数的测定 146
实验五 有机化合物的合成 150
实验六 羧酸的化学性质 153
实验七 苯甲酸钠的红外光谱测定 155
实验八 原子吸收光谱法测定血清中锌的含量 156
实验九 色谱法 157
实验十 蛋白质含量测定 160
实验十一 温度、pH、激活剂和抑制剂对酶活性的影响 171
实验十二醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质 173
实验十三 琼脂糖凝胶电泳分离血清脂蛋白 175
实验十四SDS-聚丙烯酰胺凝胶的制备与电泳 177
实验十五 糖酵解中间产物的鉴定 180
实验十六 血糖浓度的测定与胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响 181
实验十七 酮体的生成及定性 184
实验十八 血清脂类的测定 185
实验十九 纸层析法鉴定谷丙转氨酶的作用 188
实验二十 动物细胞减数分裂过程的观察 190
实验二十一 人类非显带染色体核型分析 192
实验二十二PTC（苯硫脲）尝味试验 194
实验二十三X染色质标本的制作和观察 195
实验二十四 抗原抗体反应 196
实验二十五 细胞毒试验——补体介导的细胞毒试验 205
实验二十六 免疫细胞检测 207
实验二十七 细胞因子的检测——白细胞介素2活性测定 214
第三篇 综合性实验 217
第十一章 综合性实验 217
实验一 茶叶中咖啡因的提取 217
实验二 番茄酱中番茄红素和β-胡萝卜素的提取与鉴别 219
实验三 血清γ球蛋白的分离纯化、含量测定及纯度鉴定 221
实验四 碱性磷酸酶的分离纯化、比活性测定与酶促反应动力学 225
实验五DNA的提取、鉴定与目的基因的扩增 234
实验六RNA的提取与组分鉴定 245
实验七mRNA的制备与cDNA的合成 250
实验八 核酸浓度的测定 252
实验九DNA的限制性核酸内切酶消化与DNA分子的体外连接 253
实验十 细菌感受态细胞的制备、重组质粒的转化及筛选 256
实验十一 核酸印迹杂交 259
附录 264
一、实验室规则 264
二、实验室常识 264
三、实验室安全及防护 265
四、常用有机溶剂的沸点、密度表 265
五、常见的酸碱指示剂 266
六、热浴用的液体介质 267
七、国产试剂的规格 267
八、常用缓冲液的配制方法 267
九、硫酸铵饱和度常用表 271
十、层析数据表 273
主要参考文献 276