第一篇 基本操作及常用仪器简介 1
第一章 生物化学与分子生物学常用技术 1
第一节 离心技术 1
一、离心技术的基本原理 1
二、离心机的类型和主要构造 2
三、离心方法 6
第二节 核酸的分离与纯化 9
一、核酸分离的原则 9
二、核酸分离的主要步骤 10
三、核酸的浓度、纯度测定和完整性鉴定 13
四、核酸的保存 15
第三节 蛋白质和酶的纯化 16
一、蛋白质分离的原则 16
二、蛋白质分离的主要步骤 16
三、蛋白质的纯化 17
四、蛋白质浓度的测定 21
五、蛋白质的保存 22
第四节 分光光度技术 24
一、分光光度技术的基本原理 24
二、分光光度计的种类、结构和工作原理 26
第五节 电泳技术 28
一、电泳技术的发展史 28
二、电泳技术的基本原理 28
三、影响电泳分离的主要因素 31
四、电泳的分类 33
五、常用电泳技术 35
第六节 层析（色谱）技术 51
一、层析（色谱）技术发展简史 51
二、层析方法的一般原理 52
三、层析的分类 52
四、常见的层析技术 53
第七节 聚合酶链式反应 65
一、PCR的基本原理 65
二、PCR的反应条件 69
三、常见PCR技术的种类 72
四、PCR技术的应用及其注意事项 75
第八节 印迹技术 77
一、DNA印迹 77
二、RNA印迹 78
三、蛋白质的印迹分析 78
第二章 基本实验操作 80
第一节 洗涤和干燥 80
一、玻璃仪器的洗涤清洁 80
二、玻璃仪器的干燥 81
三、沉淀的过滤和洗涤 82
第二节 常用的实验操作技术 83
一、吸量管的种类和使用 83
二、混匀 85
三、保温 85
四、过滤 85
五、离心沉淀法 85
六、实验样品的制备 86
第三章 常用仪器 88
第一节 分光光度计 88
一、仪器组成 88
二、使用和维护 89
三、注意事项 90
第二节 离心机 91
一、仪器组成 91
二、种类 91
三、使用和维护 91
第三节 电泳仪 93
一、使用方法 93
二、注意事项 93
第四节 PCR仪 93
一、使用方法 93
二、注意事项 94
第五节 真空冷冻干燥机 94
一、使用方法 94
二、注意事项 95
第六节 高压蒸汽灭菌锅 95
一、使用方法 95
二、注意事项 95
第七节 恒温培养箱 96
一、使用方法 96
二、注意事项 96
第八节 生物安全柜 96
一、使用方法 96
二、注意事项 97
第四章 实验室规则及安全防护 98
一、实验室规则 98
二、实验室的安全与防护 98
第五章 实验报告的撰写 101
一、实验报告书写的具体要求 101
二、书写实验报告的基本内容 101
第二篇 经典生物化学实验 102
第六章 蛋白质定量分析实验 102
实验一 双缩脲法测定血清蛋白质含量 102
实验二 Folin-酚试剂法测定蛋白质含量 105
实验三 紫外分光光度法测定蛋白质浓度 109
实验四 考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度 112
第七章 层析实验 115
实验五 纸层析法观察转氨基作用 115
实验六 葡聚糖凝胶柱层析分离血红蛋白与鱼精蛋白 118
实验七 离子交换层析分离混合氨基酸 121
第八章 电泳实验 123
实验八 血浆脂蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 123
实验九 SDS-PAGE测定蛋白质的分子量 126
第九章 酶学实验 130
实验十 血清谷丙转氨酶活性测定（赖氏法测定血清谷丙转氨酶） 130
实验十一 过氧化氢酶米氏常数的测定 133
第十章 分子生物学基础实验 136
实验十二 肝组织中核酸的提取和定量分析（细胞核的分离、纯化及DNA、RNA含量测定） 136
实验十三 DNA的提取及紫外吸收法测定含量——蛋白酶K-酚抽提法 142
实验十四 总RNA的提取制备与检测——异硫氰酸胍-酚-三氯甲烷一步法 146
实验十五 Northern印迹杂交 149
第三篇 综合性实验 154
实验十六 碱性磷酸酶的分离提取、比活性及Km值测定 154
实验十七 BCA法测定蛋白质浓度 160
实验十八 质粒DNA的提取 162
实验十九 DNA的限制性酶切与琼脂糖凝胶电泳 164
实验二十 质粒PUC18/GAPDH基因的PCR扩增 167
实验二十一 DNA连接实验 171
实验二十二 重组DNA转化与蓝白斑筛选 173
第四篇 自主设计性实验 179
附 实验报告范例 179
实验二十三 酪蛋白等电点的测定 180
实验二十四 胰蛋白酶对蛋白质的消化和影响酶作用的因素 182
实验二十五 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 184
实验二十六 氨中毒实验 185
实验二十七 肾上腺素、胰岛素对血糖的调节作用 186
附录一 常用缓冲溶液的配制 188
附录二 常用酸碱摩尔溶液的配制 194
附录三 常用酸碱指示剂的配制 195