第一章 分子克隆 1
第一节 聚合酶链式反应（PCR）&李宝明 武会娟 1
一、基本原理 1
二、材料、试剂与主要仪器 5
三、操作步骤 6
四、注意事项 6
第二节 琼脂糖凝胶电泳&田彦捷 高丽娟 7
一、基本原理 7
二、材料、试剂与主要仪器 10
三、操作步骤 11
四、结果分析 11
五、注意事项 14
第三节 琼脂糖凝胶中目的DNA片段的回收&田彦捷 武会娟 15
一、基本原理 15
二、材料、试剂与主要仪器 16
三、操作步骤 16
四、注意事项 17
第四节 体外连接DNA&陈尔凝 18
一、基本原理 18
二、材料、试剂与主要仪器 20
三、操作步骤 20
四、结果分析 21
五、注意事项 21
第五节 感受态细胞的制备&田彦捷 高丽娟 22
一、基本原理 22
二、材料、试剂与主要仪器 24
三、操作步骤 24
四、注意事项 25
第六节 重组质粒的转化和阳性克隆的筛选&陈尔凝 26
一、基本原理 26
二、材料、试剂与主要仪器 27
三、操作步骤 28
四、结果分析 28
五、注意事项 28
第七节 质粒DNA的提取&陈尔凝 高丽娟 29
一、基本原理 29
二、材料、试剂与主要仪器 29
三、操作步骤 30
四、结果分析 31
五、注意事项 32
第八节 DNA限制性内切酶酶切反应&马凯 34
一、基本原理 34
二、材料、试剂与主要仪器 37
三、操作步骤 37
四、结果分析 38
五、注意事项 39
第九节 DNA测序&李宝明 武会娟 40
一、基本原理 40
二、材料、试剂与主要仪器 42
三、操作步骤 42
四、结果分析 44
五、注意事项 49
第二章 实时定量PCR 51
第一节 组织总RNA的提取&李越 王琦 52
一、基本原理 52
二、材料、试剂与主要仪器 53
三、操作步骤 54
四、结果分析 55
第二节 实时定量荧光PCR&李越 王琦 57
一、基本原理 58
二、材料、试剂与主要仪器 63
三、操作步骤 65
四、结果分析 67
第三章 蛋白免疫印迹 70
第一节 组织总蛋白的提取&程小艳 武会娟 70
一、基本原理 70
二、材料、试剂与主要仪器 76
三、操作步骤 76
四、结果分析 77
五、注意事项 77
第二节 蛋白浓度测定&程小艳 武会娟 77
一、基本原理 77
二、材料、试剂与主要仪器 81
三、操作步骤 82
四、结果分析 83
五、注意事项 84
第三节 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）&程小艳 武会娟 84
一、基本原理 84
二、材料、试剂与主要仪器 88
三、操作步骤 89
四、结果分析 91
五、注意事项 91
第四节 转膜与封膜&程小艳 武会娟 92
一、基本原理 92
二、材料、试剂与主要仪器 97
三、操作步骤 98
四、结果分析 100
五、注意事项 100
第五节 抗体杂交&程小艳 武会娟 101
一、基本原理 101
二、材料、试剂与主要仪器 103
三、操作步骤 103
四、结果分析 104
五、注意事项 104
第六节 化学发光与显色&程小艳 武会娟 104
一、基本原理 104
二、材料、试剂与主要仪器 106
三、操作步骤 107
四、结果分析 107
五、注意事项 108
第四章 蛋白原核表达与纯化 109
第一节 重组蛋白小批量诱导表达&王雪蕾 伦永志 109
一、基本原理 109
二、材料、试剂与主要仪器 116
三、操作步骤 117
四、结果分析 118
五、注意事项 118
第二节 重组蛋白的提取&王雪蕾 伦永志 118
一、基本原理 118
二、材料、试剂与主要仪器 123
三、操作步骤 124
四、结果分析 124
五、注意事项 124
第三节 亲和层析仪纯化重组蛋白&魏玲 武会娟 125
一、基本原理 125
二、材料、试剂与主要仪器 128
三、操作步骤 130
四、结果分析 132
五、注意事项 132
第四节 Ni2＋柱纯化重组蛋白&魏玲 武会娟 135
一、基本原理 135
二、材料、试剂与主要仪器 136
三、操作步骤 137
四、结果分析 142
五、注意事项 143
第五章 外源基因在真核细胞中的表达 144
第一节 细胞转染&钱嘉林 李明珍 144
一、基本原理 144
二、材料、试剂与主要仪器 148
三、操作步骤 149
四、注意事项 151
第二节 稳定转染细胞系的建立&伦永志 蒋中秀 152
一、基本原理 152
二、材料、试剂与主要仪器 152
三、操作步骤 153
四、结果分析 161
五、注意事项 163
第六章 小干扰RNA（siRNA）的应用&蒋中秀 伦永志 165
第一节 siRNA的作用机制与应用 165
一、siRNA的作用机制 165
二、RNAi的潜能 166
三、siRNA的应用 167
第二节 siRNA的设计、制备和转染 170
一、siRNA和RNAi作用的特点 170
二、siRNA的设计 171
三、siRNA的制备 172
四、siRNA的转染 173
第三节 利用siRNA技术干扰目的基因 174
一、材料、试剂与主要仪器 174
二、操作步骤 175
三、结果分析 181
四、注意事项 183
第七章 计算机辅助序列设计 184
第一节 PCR引物设计&马凯 184
第二节 Real Time PCR引物设计&安云鹤 195
第三节 siRNA的设计&安云鹤 202
第八章 分子生物学实验常用资料&迟庆 伦永志 207
第一节 常用数据及换算公式、图表 207
第二节 常用试剂与缓冲液的配制方法 216
参考文献 230