第一篇 常用分子生物学实验技术及原理 3
第一章 载体 3
第二章 工具酶 13
第三章 电泳 22
第四章 真核生物基因组文库的构建 29
第五章cDNA文库的构建 33
第六章PCR基因扩增 39
第七章 克隆化 DNA的定点突变 45
第八章DNA序列测定 54
第九章 基因表达 63
第十章 印迹法及分子检测 69
第十一章 实时荧光定量PC R技术 75
第二篇 学生实验 85
实验一 大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒DNA的转化 85
实验二 质粒DNA的提取及其定性定量分析 88
实验三 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 92
实验四PC R基因扩增及产物的回收 96
附 扩增片段的全序列 99
实验五DNA重组 101
实验六 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达及检测 107
Ⅰ外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 107
Ⅱ活性分析检测表达蛋白 109
ⅢSDS-PAGE检测表达蛋白 110
实验七 蛋白质印迹 114
附 小鼠腹水多克隆抗体制备 117
实验八 哺乳动物基因组DNA的分离及分析 119
实验九 植物基因组DNA的提取 123
实验十 大肠杆菌基因组DNA的提取 126
实验十一 植物总RNA的提取 129
实验十二RT - PCR（反转录-聚合酶链反应） 133
附 β-微管蛋白编码序列 135
实验十三 实时荧光定量PCR对小鼠脾细胞特定基因表达的分析 137
实验十四 利用聚合酶链反应（PC R）定点突变 142
实验十五 寡核苷酸介导的定点突变 146
实验十六Southern杂交 150
Ⅰ大肠杆菌基因组DNA Southern杂交 150
Ⅱ小鼠肝基因组DNA Southern杂交 155
实验十七 双脱氧链终止法测定DNA序列 159
实验十八DNA核苷酸序列分析——银染色法 164
实验室仪器操作技术 169
实验设计选录 169
分子克隆经验小结 169
附录 171
一、常用核酸、蛋白质换算数据 171
二、氨基酸符号及相应密码子 172
三、常见市售酸碱的浓度 172
四、离心机转速与相对离心力的换算 173
五、常用电泳缓冲液及凝胶加样缓冲液 175
六、常用限制酶酶切位点及缓冲液 178
七、分子生物学常用试剂和缓冲液的配制 179
八、常用细菌培养基和抗生素溶液 182
九、X射线底片的冲洗方法 185
十、溴化乙锭溶液的净化处理 186