第1章 基因操作:一项全能技术 1
导言 1
序列分析 1
体内生物化学 2
新药物 3
生物技术:一个新兴产业 4
大肠杆菌扮演核心角色 6
全书概览 6
第2章 基本技术 9
导言 9
基本问题 9
解决方法:基本技术 10
琼脂糖凝胶电泳 10
核酸印迹 12
对大肠杆菌的转化 18
多聚酶链式反应(PCR) 20
第3章 DNA分子的切割与连接 27
切割DNA分子 27
连接DNA分子 37
第4章 质粒和噬菌体载体的基础生物学 45
质粒生物学和简单的质粒载体 45
质粒DNA的纯化 51
质粒克隆载体的理想特性 52
噬菌体λ 57
用单链DNA载体进行DNA克隆 63
第5章 柯斯质粒,质粒和其他先进的载体 67
导言 67
用于克隆大片段DNA的载体 67
特殊用途载体 74
合而为一:组合了多种特性的载体 88
第6章 克隆策略 90
导言 90
克隆基因组DNA 91
cDNA克隆 98
筛选的策略 109
差异克隆 120
第7章 测序和诱变 126
导言 126
DNA测序的基本策略 126
全基因组测序 133
分析序列数据 133
改变基因:定点诱变 140
第8章 在大肠杆菌以外的其他细菌中的克隆 147
导言 147
将DNA转入细菌细胞中 147
在大肠杆菌以外的其他革兰氏阴性菌中进行克隆 153
在革兰氏阳性菌中进行克隆 156
部分同源重组 165
第9章 在酿酒酵母和其他真菌中克隆 166
导言 166
导入真菌的DNA的命运 167
应用于真菌的质粒载体 168
类似反转录病毒的载体 171
克隆基因的表达 175
蛋白在真菌中的过量表达 176
专用载体 179
酵母表面展示 180
识别编码特殊细胞活性的基因 184
确定特定基因的功能 184
第10章 动物细胞的基因转移 188
导言 188
DNA介导的转化 189
经由病毒转导的基因转移 201
动物细胞表达系统总结 211
第11章 动物的基因操作 215
导言 215
哺乳动物的基因操作 216
对其他脊椎动物进行DNA转移 227
无脊椎动物的DNA转移 230
第12章 植物基因转化 234
导言 234
农杆菌介导的转化 238
DNA直接转化植物 251
整株(in planta)转化 253
叶绿体转化 253
植物病毒载体 254
第13章 转基因技术的进展 260
导言 260
诱导表达系统 260
位点特异性重组的运用 266
用于基因抑制的转基因策略 273
功能基因组学中的转基因技术 279
第14章 重组DNA技术的应用 288
导言 288
主题1 核酸序列可以作为诊断工具 289
可变数目串联重复(VNTR)多态性 294
主题2 用于遗传疾病的新药与新疗法 298
主题3 与传染病的斗争 308
主题4 蛋白质工程 315
主题5 代谢工程 319
主题6 21世纪的植物育种 327
结束语:从基因到基因组 334
参考文献 336
索引 413