上篇基因克隆理论 1
第一章 概论 1
第一节 基因研究的历史回顾 1
第二节 遗传的物质基础 2
第三节 基因和基因克隆的概念 3
第四节 基因工程的研究内容和安全性 4
第二章 基因的结构和功能 8
第一节 核酸的结构和功能 8
第二节 遗传物质的组织结构 13
第三节 基因组的结构和功能 21
第三章 蛋白质的结构和功能 33
第一节 蛋白质的基本单位和分类 33
第二节 蛋白质的分子结构和理化性质 37
第三节 蛋白质的生物学功能 47
第四章 基因克隆中常用的工具酶 50
第一节 限制性核酸内切酶 50
第二节DNA聚合酶 54
第三节DNA连接酶 58
第四节 修饰酶 59
第五章 基因克隆的载体 63
第一节 质粒载体 63
第二节 噬菌体载体 77
第三节 病毒载体 82
第四节 其他载体 89
第六章 基因的表达和调控 93
第一节 原核生物基因的表达调控 94
第二节 真核生物基因的表达调控 110
第七章 基因克隆在治疗和诊断中的应用与进展 125
第一节 基因治疗研究进展 125
第二节 基因诊断的研究进展 128
第八章 基因克隆技术在生物制药中的应用 134
第一节 概况 134
第二节 基因工程药物 135
第三节 基因工程抗体 135
第四节 基因工程疫苗 136
第五节 核酸疫苗 137
第六节 生物医药的发展方向 137
下篇 基因克隆技术 139
第九章 分子生物实验中的常用仪器及试剂的配制 139
第一节 分子生物实验室的常规仪器及设备 139
第二节 常用试剂的配制 141
第十章 琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳 145
第一节 原理 145
第二节 琼脂糖电泳 145
第三节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 146
第四节 电泳的影响因素 147
第五节 电泳中常用的指示剂和染色剂 148
第十一章 目的基因克隆 149
第一节 化学合成法获取目的基因 149
第二节PCR扩增法获取目的基因 149
第三节RT-PCR法获取目的基因 154
第十二章 载体的准备 157
第一节 感受态细胞的制备和质粒的转化 157
第二节 质粒DNA的提取 158
第十三章 目的基因与载体的连接 160
第一节 目的基因和载体的酶切 160
第二节 从凝胶中回收DNA 162
第三节 目的基因和载体的连接 163
第十四章 重组载体的检测 166
第一节 酶切和电泳检测 166
第二节DNA序列测序鉴定 166
第十五章 重组载体的转染 172
第一节 磷酸钙共沉淀法 172
第二节 脂质体法 172
第三节 反转录病毒感染法 173
第四节 腺病毒载体转染法 174
第五节 结果和转染方法的选择 175
第十六章 重组体插入基因、RNA和表达产物蛋白质的检测 177
第一节Southern blot 177
第二节Northern blot 180
第三节Western blot 182
第十七章 大鼠BDNF基因的构建及骨髓间充质干细胞转染 187
第一节 实验原理与实验目的 187
第二节 实验设备、试剂及配制 187
第三节 实验步骤 193
第十八章 纳米粒子介导人生存素基因修饰嗅鞘细胞实验 210
第一节 实验原理 210
第二节 实验所需设备、试剂及其配制 211
第三节 实验步骤 212
第四节 实验结果 216
第五节 结果分析 218
第十九章 小鼠NT-4基因的体外构建、骨髓间充质干细胞转染和脑内移植 221
第一节 实验目的及实验原理 221
第二节 小鼠NT- 4基因的体外构建及骨髓间充质干细胞转染 221
第三节NT- 4-GFP转基因骨髓间充质干细胞脑内移植 234
第四节 结果分析与经验体会 239
第二十章 慢病毒携带人端粒酶基因 hTERT的基因克隆技术 240
第一节 实验目的 240
第二节 实验设备、试剂及其配制 240
第三节 实验步骤 248
第四节 实验结果 259
第五节 结果分析 262
第六节 经验体会 263