第一章 原生质体的特点 1
第二章 设备与条件 4
第一节 常用设备与用具 4
一、仪器设备 5
二、玻璃器皿和用具 7
第二节 无菌条件 9
一、无菌室 10
二、超净工作台 10
三、无菌接种箱 12
第三节 培养条件 12
第三章 原生质体的分离 14
第一节 材料的选择 14
一、无菌幼苗 15
二、悬浮细胞及愈伤组织 16
三、根及贮藏器官 16
四、花粉 17
五、胚性细胞系 19
六、其它材料 20
第二节 材料的预处理 20
第三节 酶解液 23
一、用于分离原生质体的酶 23
二、渗透压稳定剂 26
三、质膜稳定剂和其它试剂 26
第四节 原生质体的分离 27
一、分离方法 28
二、原生质体的纯化 32
三、原生质体的活性检测 36
四、平板密度 37
第五节 原生质体衍生系统的制备 38
一、亚原生质体的自发形成 39
二、质壁分离诱导亚原生质体 40
三、密度梯度离心法制备亚原生质体 41
四、用核失活技术来制备胞质体 42
第四章 原生质体的培养 45
第一节 培养基 45
一、渗透压稳定剂和碳源 47
二、无机盐 48
三、植物生长调节剂 50
四、其它有机成分 52
五、pH值 52
第二节 培养方法 53
一、固体培养 53
二、液体培养 55
三、固液结合培养法 60
第三节 培养过程中的其它因素 61
一、环境条件 61
二、培养中的观察 62
三、培养过程中的管理 62
第五章 原生质体分化与植株再生 63
第一节 细胞壁再生 63
第二节 分裂和生长 65
第三节 器官发生 66
一、器官发生的激素控制 66
二、器官发生的细胞来源 69
三、器官发生的方式 69
第四节 胚胎发生 70
一、胚胎发生的控制因素 70
二、胚胎发生的同步化 73
第五节 再生植株的移栽 75
第六章 原生质体融合 76
第一节 诱导融合的方法 77
一、早期的融合方法 77
二、聚乙二醇法 78
三、电融合法 80
四、激光诱导细胞融合 89
第二节 融合杂种的筛选 90
一、形态观察法 90
二、营养差异法 93
三、突变互补法 94
四、荧光标记法 96
第三节 胞质杂种的产生 99
第四节 体细胞杂种的鉴定 101
第七章 原生质体的摄取与遗传转化 103
第一节 外源物质的摄取 103
一、叶绿体的摄取 105
二、细胞核和染色体的摄取 106
三、细菌和真菌的摄取 106
四、藻类的摄取 107
五、病毒的摄取 108
六、其它 108
第二节 原生质体的转化 109
一、共培养法 109
二、脂质体介导法 110
三、PEG转化法 111
四、电击穿孔法 112
五、微射轰击法 113
六、微注射法 115
附录1 常见培养基的成分 116
附录2 KM8p培养基中的添加剂 119
参考文献 120