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Ⅰ 近年来酶组织化学研究技术的发展动向 1

Ⅱ 基本技术 7

1. 活性检测法 7

1-1 检测法的选择 8

1-2 固定(Fization) 8

a. 固定液、固定温度的选择 8

b. 固定方法和时间 9

1-3 孵育反应所需切片的制作 10

1-4 缓冲液的选择 10

1-5 孵育(反应) 11

a. 配制孵育液时的注意事项 11

b. 孵育温度和时间 11

c. 切片孵育法 11

1-7 孵育后的操作 12

1-6 研究反应特异性的对照实验 12

1-8 人工产物 13

2. 同功酶 14

2-1 检测同功酶的方法 15

a. 血清凝胶法 15

b. 聚丙烯酰胺法 16

3. 培养细胞的染色法 18

a. 培养细胞的酶组织化学 18

b. 培养的视网膜细胞的乙酰胆碱酯酶(ACHE) 19

c. 单层培养以外的培养细胞染色法 20

Ⅲ 氧化还原酶(Oxidoreductase) 21

1. 琥珀酸脱氢酶(Succinate dehydrogenase) 21

a. 光学显微镜切片的SDH染色 21

b. 电子显微镜用的SDH染色 22

2. 乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase) 25

a. 光学显微镜证明法 27

b. 电子显微镜证明法 28

3. 山梨醇脱氢酶(Sorbitol dehydrogenase) 29

a. 组织化学的研究法 29

b. 免疫组织化学的方法 32

4. 乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase)(LDH) 35

a. 酶组织化学(大鼠肝脏) 35

b. 免疫组织化学 38

5. 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(Glucose-6-phcsphate dehydrogenase)(G-6-PDH) 41

6. β-羟基丁酸脱氢酶(β-Hydroxybutyrate dehydrogenase) 43

7. 苹果酸脱氢酶(Malate dehydrogenase) 44

8. 异柠檬酸脱氢酶(Isocitrate dehydrogenase) 45

9. 尿酸氧化酶(Urate oxidase) 45

10. 葡萄糖氧化酶(Glueose oxidase) 47

11. D-氨基酸氧化酶(D-Aminoacid oxidase) 48

12. 烟酰胺腺嘌呤二核苷氧化酶(NAD(P)H oxidase) 49

13. 细胞色素氧化酶(Cytochrome oxidase) 52

14. 过氧化物酶(Peroxidase) 57

15. 过氧化氢酶(Catalase) 62

a. 酶的组织化学法(DAB法) 62

b. 免疫组织化学法 65

Ⅳ 转移酶(Transferase) 67

1. 氨甲酰转移酶(Carbamoyl transferase) 67

1-1 鸟氨酸氨甲酰转移酶(OCT) 67

2. 谷-草转氨酶(Glutamic oxaloacetic transaminase, GOT) 68

a. 金属盐法 68

b. 偶氮色素法 69

a. 偶氮色素法 71

1-1 酯酶(羧酸酯水解酶，Carboxylic ester hydrolase) 71

1-2 光镜的证明方法 71

1. 酯酶(Esterase) 71

Ⅴ 水解酶(Hydrolase) 71

b. 吲哚酚(Indoxyl)法 77

c. 用抑制剂及激活剂对非特异性酯酶的鉴别 79

d. 胆碱酯酶和乙酰胆碱酯酶 81

1-3 电镜的证明法 82

a. 非特异性酯酶 82

b. 乙酰胆碱酯酶、胆碱酯酶(Acetylcholinesterase, Cholinesterase) 82

2. 磷酯酶(phospholipase) 84

2-1 磷酯酶A(Phospholipase A) 85

2-2 磷酯酶B(Phospholipase B) 86

3. 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALPase) 88

3-1 活性检测法 88

a. 金属盐法 89

b. 偶氮色素法 91

3-2 同功酶(isoenzyme) 93

3-3 免疫学方法 101

4. 对硝基苯酚磷酸酶(NPP酶P-Nitrophenyl phosphatase) 103

4-1 NPP酶的种类 103

4-2 哇巴因敏感，K+依赖性P-NPP酶(K+-NPP酶，Ouabain-sensitive,K+-dependent P-nitrophenyl phosphatase) 104

4-3 酸性对硝基苯酚磷酸酶(酸性NPP酶) 107

4-4 H+-K+-ATP酶 108

5. 辅酶A磷酸酶(CoA phosphatase) 109

6. 酸性磷酸酶(Acid phosphatase) 110

6-1 活性检测法 110

a. 金属盐法(Gomori法) 111

b. 偶氮色素法 114

6-2 免疫学方法 115

7. 葡萄糖-6-磷酸酶(Glucose-6-phosphatase) 118

8. 果糖-1，6-二磷酸酶(Fructose-1,6-diphosphatase) 123

a. 果糖-1.6-二磷酸酶的检测法(磷酸捕捉法) 124

b. 果糖-1.6-二磷酸酶(三步法) 125

9. 3＇，5＇-环核苷酸磷酸二酯酶(Cyclic 3＇，5＇-nucleotide phosphodiesterase) 126

［内源性5＇-核苷酸酶应用法］ 128

10. 5＇-核苷酸酶(5＇-Nucleotidase) 132

11. 硫胺素单磷酸酶(Thiamine monophosphatase)(TMP酶) 136

12. 硫胺素焦磷酸酶(Thiamine pyrophosphataseTPP酶) 137

13. 硫胺素三磷酸酶(Thiamine triphosphatase简称TPP酶) 138

14. 腺苷三磷酸酶(Adenosine triphosphatase简称ATP酶) 140

14-1 Mg2+-腺苷三磷酸酶(Mg2+-ATP酶) 140

14-2 Na+-K+-腺苷三磷酸酶(Na+-K+-ATP酶) 142

14-3 Ca2+ATP酶(Ca2+-adenosine Triphosphatase) 144

15. 硫酸酯酶(Sulfatase) 147

16. 腺苷酸环化酶和鸟苷酸环化酶(Adenylate cyclase和Guanylate cyclase) 150

17. 氨基肽酶(Aminopeptidase) 153

17-1 氨基肽酶M(Aminopeptidase M) 154

17-2 二肽(氨基)肽酶Ⅳ［Dipeptidyl (amino)peptidase Ⅳ］ 156

17-3 二肽(氨基)肽酶Ⅱ［Dipeptidyl(amino)peptidase Ⅱ］ 156

18. 胰蛋白酶及其它 157

18-1 胰蛋白酶(Trypsinenzyme),类胰蛋白酶(Trypsin-like enzyme) 157

18-2 肠肽酶(Enteropeptidase) 158

18-3 胰蛋白酶原(Trypsinogen) 158

19. 脂蛋白酶(Esteroprotease) 164

a. 酶谱 164

b. 酶组织化学 166

Ⅵ 裂解酶(Lyase) 167

1. 醛缩酶(Aldolase) 167

2. 柠檬酸合成酶(Citrate synthase) 168

3. 碳酸酐酶(Carbonic anhydrase) 169

Ⅶ 混合-功能氧化酶(Mixed-function oxidase) 173

跋 174